申请/专利权人：沈阳药科大学

申请日：2019-03-01

公开（公告）日：2021-08-10

公开（公告）号：CN109761995B

主分类号：C07D493/10(20060101)

分类号：C07D493/10(20060101);A61P35/00(20060101);A61P35/02(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.08.10#授权;2019.06.11#实质审查的生效;2019.05.17#公开

摘要：本发明涉及天然药物及药物化学领域，涉及延命草素型二萜氨基酸酯衍生物及其制备方法和用途。具体涉及延命草素型二萜的14‑位羟基拼合氨基酸衍生物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明所述的延命草素型二萜衍生物及其药学上可接受的盐为通式I所示。其中，R如权利要求书和说明书所述。

主权项：1.通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐： 其中，R为取代的C1-C4烷基，所述取代基为苯基或吲哚基，。

全文数据：延命草素型二萜氨基酸酯衍生物及其制备方法和用途技术领域本发明涉及天然药物及药物化学领域，涉及延命草素型二萜氨基酸酯衍生物及其制备方法和用途。具体涉及一类延命草素型二萜的14-位羟基与氨基酸成酯的衍生物。还涉及这些延命草素型二萜的14-位羟基拼合氨基酸衍生物的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。背景技术延命草素enmein是从唇形科香茶菜属Rabdosia植物中分离出的一种贝壳杉烷二萜类ent-kauranediterpenoid天然有机化合物，1958年，Takshashi等首次从蓝萼香茶菜Rabdosiajaponica中得到enmein，1966年Natsume等用X射线衍射法确定了enmein的立体结构，其复杂结构吸引了化学家和药物学家的目光。氨基酸因其结构多样性、独有的酸碱性和光学活性，使其发挥着不可替代的作用。本发明以延命草素型二萜为先导化合物，利用拼合原理，将不用类型的氨基酸连接到其分子结构的14-位羟基上，设计并合成了通式为I的延命草素型二萜氨基酸酯衍生物。发明内容本发明要解决的技术问题是寻找抗肿瘤活性好的延命草素型二萜氨基酸酯衍生物，并进一步提供一种包含该衍生物的药物组合物，所述的延命草素型二萜基酸酯衍生物或其组合物具有抗肿瘤作用。为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为H，取代或未取代的C1-C4烷基，所述取代基为5-6元杂芳基、5-6元芳基，或5-6元芳环或芳杂环并5-6元芳环或芳杂环，所述杂芳基含有1-3个N、O或S的杂原子。本发明优选通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为H，取代或未取代的C1-C4烷基，所述取代基为5-6元杂芳基、苯基或吲哚基，所述杂芳基含有2个N原子。本发明优选通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为本发明优选通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为本发明优选通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为本发明优选如下衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：本发明通式I的衍生物可用下列方法制备得到：将冬凌草甲素1溶解于水中与高碘酸钠在室温反应，得到延命草素型衍生物2，随后将2溶解于丙酮中，与琼斯试剂Jonesreagent反应，得到6-位氧化衍生物3。6-位氧化衍生物3溶解于二氯甲烷DCM中，分别与叔丁氧羰基Boc-L-氨基酸或Boc-D-氨基酸4在EDCIDMAP条件下室温反应得到延命草素型二萜-Boc-氨基酸酯衍生物5。延命草素型二萜-Boc-氨基酸酯衍生物5在DCM三氟乙酸TFA条件下反应，脱去Boc保护基，得到目标化合物6。本发明所述的延命草素型二萜基酸酯衍生物或其组合物具有明显的抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物，所述的肿瘤可以为乳腺癌、肝癌、胃癌、前列腺癌、肺癌或白血病。具体实施方式实施例1称取延命草素型母核352mg，0.14mmol，溶于DCM5mL中，依次加入N-Boc-甘氨酸40mg，0.23mmol、EDCI62mg，0.32mmol、DMAP9mg，0.07mmol，室温搅拌反应，TCL监测反应进程，8h后终止反应。将反应液倾入20mL冰水混合物中，DCM萃取30mL×3，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗产物5，未经纯化，直接取中间体570mg，0.14mmol溶于DCM3mL中，在冰浴条件下加入100μLTFA，转移至室温搅拌反应，TCL监测反应进程，8h后终止反应。将反应液倾入冰水混合物中，然后加入饱和碳酸氢钠溶液，调pH至8-9，用DCM萃取30mL×3，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗产物，经硅胶柱色谱分离二氯甲烷：甲醇＝60：1，得黄色粉末化合物6，收率17％。HRMSESImzcalcdforC22H28NO7[M+H]+418.1860,found418.1821.1HNMRCD3OD,400MHzδ6.21s,1H,14-CH,6.04s,1H,17-CH2,5.73s,1H,17-CH2,4.85m,1H,1-CH,4.48d,J＝10.11Hz,1H,20-CH2,3.89d,J＝10.11Hz,1H,20-CH2,3.84d,J＝17.50Hz,1H,-CH2NH2,3.71d,J＝17.50Hz，1H,-CH2NH2,3.34d，J＝7.78Hz,1H,13-CH,2.64m,1H,-CH2,2.37s,1H,10-CH,2.22m,1H,8-CH,1.52-2.01m,7H,-CH2,1.19s，3H，18-CH3，1.06s，3H，19-CH3.13CNMRCD3OD,100MHzδ198.97,177.25,169.18,168.26，148.98,122.21,77.35,76.38,72.27,61.45,51.94,48.12,41.76,40.96,36.92，33.94,32.30,30.80,24.04，23.93，19.66,18.37。实施例2参照实施例1的合成方法制备。黄色粉末，收率37％。HRMSESImzcalcdforC23H30NO7[M+H]+432.2017,found432.1945.1HNMRCD3OD,400MHzδ6.22s,1H,14-CH,5.99s,1H,17-CH2,5.74s,1H,17-CH2,4.85m,1H,1-CH,4.48d,J＝10.08Hz,1H,20-CH2,4.00q,1H,CH3CHNH2,3.90d,J＝10.08Hz,1H,20-CH2,3.34d,J＝9.53Hz,1H,13-CH,2.64m,1H,-CH2,2.37s,1H，10-CH,2.23m,1H,8-CH,1.52-2.01m,7H,-CH2,1.46d,J＝7.24Hz,3H,CH3CHNH2,1.19s,3H,18-CH3,1.06s,3H,19-CH3.13CNMRCD3OD,100MHzδ199.01,177.25,170.39,169.07,148.94,122.22,77.39,76.40,72.27,61.38,51.93,49.73,48.12,41.73,36.91,33.94,32.30,30.75,27.71,24.03,23.94,19.66,15.93。实施例3参照实施例1的合成方法制备。黄色粉末，收率15％。HRMSESImzcalcdforC31H35N2O7[M+H]+547.2439,found547.2272.1HNMRCD3OD,400MHzδ7.48m,1H,Ar-H,7.41m,1H,Ar-H,7.19s,1H,Ar-NH-CH,7.15m,1H,Ar-H,7.08m,1H,Ar-H,6.04s,1H,14-CH,5.78s,1H,17-CH2,5.43s,1H,17-CH2,4.80m,1H,1-CH，4.44d，J＝10.08Hz，1H，20-CH2,4.18m,1H，-CHNH2,3.85d,J＝10.08Hz,1H,20-CH2，3.32m，1H，-CH2,2.48d,J＝9.46Hz,1H,13-CH,2.41m,1H,-CH2,2.33s,1H,10-CH,2.13m,1H,8-CH,1.50-2.33m,8H,-CH2,1.17s,3H,18-CH3,1.03s,3H,19-CH3.13CNMRCD3OD,100MHzδ198.89,177.23,170.18,169.18,148.56,138.14,128.36,125.48,122.95,122.03,120.34,118.77，112.73，107.75，77.24，76.40，72.23，61.38，54.61，51.89,48.04,41.26,36.86，33.91,32.27,30.55,27.81,27.70,23.99,23.91,19.51。实施例4参照实施例1的合成方法制备。黄色粉末，收率73％。HRMSESImzcalcdforC31H34N2O7Na[M+Na]+569.2258,found569.2130.1HNMRCD3OD,400MHzδ7.51m,1H,Ar-H,7.38m,1H,Ar-H,7.19s,1H,Ar-NH-CH,7.14m,1H,Ar-H,7.05m,1H,Ar-H,6.21s,1H,14-CH，5.94s，1H，17-CH2，5.64s，1H,17-CH2,4.85m，1H,1-CH,4.46d,J＝10.08Hz,1H,20-CH2,4.26m,1H,-CHNH2,3.92d,J＝10.08Hz,1H,20-CH2,3.42m,1H,-CH2,3.21d,J＝9.45Hz,1H,13-CH,3.14m，1H,-CH2,2.58m,1H,-CH2,2.36s,1H,10-CH,2.23m,1H,8-CH,1.45-2.01m,7H,-CH2,1.18s,3H,18-CH3,1.04s，3H,19-CH3.13CNMRCD3OD，100MHzδ199.29，177.30，169.95，168.70，148.74,138.33,127.91,125.93,122.89，122.39，120.27，118.73，112.70，107.78，77.40，76.32，72.33，61.31，54.38，51.91，48.19，41.74，36.87，33.92,32.30,30.65,27.70,27.59,24.05,23.94,19.62。实施例5参照实施例1的合成方法制备。黄色粉末，收率60％。HRMSESImzcalcdforC29H33NO7Na[M+Na]+530.2149,found530.2085.1HNMRCD3OD,400MHzδ7.36m,1H,Ar-H,7.32m,2H,Ar-H,7.23m,2H,Ar-H,6.12s,1H,14-CH,5.93s,1H,17-CH2,5.61s,1H,17-CH2,4.83m,1H,1-CH,4.45d,J＝10.08Hz,1H,20-CH2,4.23t,1H,-CHNH2,3.88d,J＝10.08Hz,1H,20-CH2,3.14d,J＝7.32Hz,2H,Ar-CH2,3.02d,J＝9.39Hz,1H,13-CH,2.58m,1H,-CH2,2.36s,1H,10-CH,2.19m,1H,8-CH,1.47-2.36m,7H,-CH2,1.18s,3H,18-CH3,1.05s,3H,19-CH3.13CNMRCD3OD,100MHzδ198.91,177.22,169.57,169.14,148.60,135.31,130.39×2,130.12×2,128.94,122.39,77.37,76.41,72.25,61.36,54.88,51.89,48.05,41.55,37.38,36.85,33.92,32.29,30.63,27.70,23.99,23.94,19.58。实施例6参照实施例1的合成方法制备。黄色粉末，收率77％。HRMSESImzcalcdforC29H34NO7[M+H]+508.2330,found508.2273.1HNMRCD3OD,400MHzδ7.25-7.34m,5H,Ar-H,6.17s,1H,14-CH,5.96s,1H,17-CH2,5.65s,1H,17-CH2,4.87m,1H,1-CH,4.48d,J＝10.10Hz,1H,20-CH2,4.28m,1H,-CHNH2,3.92d,J＝10.10Hz,1H,20-CH2,3.24m,2H,Ar-CH2,2.95m,1H,13-CH,2.62m,1H,-CH2,2.37s,1H,10-CH,2.24m,1H,8-CH,1.49-2.08m,7H,-CH2,1.19s,3H,18-CH3,1.05s,3H,19-CH3.13CNMRCD3OD,100MHzδ199.14,177.27,169.83,168.68,148.57,135.74,130.34×2,130.11×2,128.73,122.47,77.48,76.30,72.33,61.28,55.11,51.91,48.20,41.73,36.93,36.87,33.93,32.30,30.73,27.70,24.05,23.95,19.62。药理试验实验设备与试剂仪器超净工作台苏净集团安泰公司恒温培养箱ThermoelectronCorporation酶标仪BIO-RAD公司倒置生物显微镜重庆光学仪器厂试剂细胞培养基RPMI-1640、DMEM高糖GIBCO公司胎牛血清杭州四季清有限公司CCK-8Biosharp公司产品台盼蓝Solarbio公司产品DMSOSigma公司细胞株人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株Bel-7402、人胃癌细胞株SGC-7901、人急性早幼粒白血病细胞HL-60、人前列腺癌细胞PC-3、人肺腺癌细胞A-549、人慢性髓系白血病细胞K562、人正常肝细胞L-02实验方法细胞抑制活性实验方法细胞在37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中常规培养。培养液为含10％热灭活胎牛血清，青霉素100UmL和链霉素100UmL的RPMI1640细胞培养基。48h更换培养液，细胞贴壁后，用0.25％胰蛋白酶消化传代。实验用细胞均处于对数生长期，台盼蓝拒染法表明细胞活力95％。取处于对数生长期状态良好的细胞一瓶，加入消化液0.125％胰蛋白酶+0.01％EDTA消化，计数2～4×104cellmL，制成细胞悬液接种于96孔板上，100μL孔，置恒温CO2培养箱中培养24小时。换液，加入受试药物，100μL孔，培养72小时。将CCK-8加入96孔板中，50μL孔，培养箱中孵育4小时。吸去上清液，加DMSO，200μL孔，平板摇床上震荡10分钟。受试物考察0.001至100μM以十倍浓度递增的6个浓度，用酶联免疫监测仪在波长为450nm处测定每孔的吸光度，分别计算各浓度下的细胞抑制率。抑制率计算方法：药敏孔相对OD值＝药敏孔绝对OD值﹣空白对照孔绝对OD值实验结果表1实施例对7种人类癌细胞株和1种人类正常细胞抗增殖活性的IC50值μMNT：未测试。药理试验证明，本发明的延命草素型二萜氨基酸酯衍生物具有更好的抗肿瘤细胞增殖活性，活性强于延命草素型母核，对某些肿瘤细胞系具有意想不到的生长抑制作用。并且对肿瘤细胞和正常细胞具有一定的选择性，可以用于进一步制备抗肿瘤药物。

权利要求：1.通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为H，取代或未取代的C1-C4烷基，所述取代基为5-6元杂芳基、5-6元芳基，或5-6元芳环或芳杂环并5-6元芳环或芳杂环，所述杂芳基含有1-3个N、O或S的杂原子。2.如权利要求1所述的通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为H，取代或未取代的C1-C4烷基，所述取代基为5-6元杂芳基、苯基或吲哚基，所述杂芳基含有2个N原子。3.如权利要求1或2所述的通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为-H、4.如权利要求1-3任何一项所述的通式I所示延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐：其中，R为-H、5.如下的延命草素型二萜氨基酸酯衍生物及其药学上可接受的盐，选自：6.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1-5任何一项所述的延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。7.如权利要求1所述的通式I所示的延命草素型二萜氨基酸酯衍生物及其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于：将冬凌草甲素1溶解于水中与高碘酸钠在室温反应，得到延命草素型衍生物2，随后将2溶解于丙酮中，与琼斯试剂反应，得到6位氧化的延命草素型衍生物3；6位氧化延命草素型衍生物3溶解于二氯甲烷中，分别与叔丁氧羰基Boc-L-氨基酸或Boc-D-氨基酸4在EDCIDMAP条件下室温反应得到6-氧代延命草素型-Boc-氨基酸酯衍生物5；6-氧代延命草素型-Boc-氨基酸酯衍生物5在DCMTFA三氟乙酸条件下低温反应，脱去Boc保护基，得到目标化合物6：8.权利要求1-5任何一项所述的通式I所示的延命草素型二萜氨基酸酯衍生物、异构体及其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。9.权利要求6所述的药物组合物在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。10.如权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为乳腺癌、肝癌、胃癌、前列腺癌、肺癌或白血病。

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