申请/专利权人：山西大学

申请日：2021-06-10

公开（公告）日：2021-09-03

公开（公告）号：CN113337542A

主分类号：C12N15/861(20060101)

分类号：C12N15/861(20060101);C12N15/30(20060101);A61K39/008(20060101);A61P33/02(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的撤回

法律状态：2023.07.28#发明专利申请公布后的撤回;2021.09.21#实质审查的生效;2021.09.03#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，针对目前利什曼病的现状公开了一种高效表达利什曼原虫磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶PEPCK的人复制缺陷型重组腺病毒载体。具体为将修饰后的PEPCK基因与pShuttle‑CMV载体构建的重组载体pShuttle‑CMV‑Leish‑PEPCK和pAdEasy‑1载体进行同源重组，得到的质粒载体pAd5‑L.m‑PEPCK经过PacI切割，转染进人胚肾细胞293而获得复制缺陷型重组腺病毒载体Ad5‑L.m‑PEPCK。经考马斯亮蓝R250染色和特异抗体抗His标签抗体的Westernblot分析表明重组腺病毒载体Ad5‑L.m‑PEPCK能够高效表达PEPCK蛋白。由于利什曼原虫磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶PEPCK是最近发现的最有免疫优势的利什曼病抗原。因此本发明重组腺病毒载体Ad5‑L.m‑PEPCK可用于利什曼病的疫苗，从而有助于利什曼病的防控。

主权项：1.一种高效表达利什曼原虫PEPCK的人复制缺陷型重组腺病毒载体，其特征在于，所述重组腺病毒载体为Ad5-L.m-PEPCK，具体通过以下步骤制备得到：步骤1，合成携带在羧基末端含6xHis标签的PEPCK全长编码基因；步骤2，对步骤1合成的羧基末端含6xHis标签的PEPCK基因进行修饰，即在PEPCK基因羧基末端添加11个额外的修饰氨基酸；步骤3，构建重组载体pShuttle-CMV-Leish-PEPCK；步骤4，将步骤3构建的重组载体pShuttle-CMV-Leish-PEPCK与pAdEasy-1载体进行同源重组，生成所述重组腺病毒载体Ad5-L.m-PEPCK；步骤5，重组腺病毒载体Ad5-L.m-PEPCK的分离纯化。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山西大学 高效表达利什曼原虫PEPCK的人复制缺陷型重组腺病毒载体

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