申请/专利权人：尚华科创投资管理(江苏)有限公司

申请日：2017-07-05

公开（公告）日：2023-01-20

公开（公告）号：CN107586339B

主分类号：C07K16/28

分类号：C07K16/28;G01N33/68;A61K39/395;A61P37/00;A61P29/00;A61P31/00;A61P35/00

优先权：["20160706 CN 2016105279960"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.01.20#授权;2019.06.21#实质审查的生效;2018.01.16#公开

摘要：本发明公开了一种BLyS抗体及其制备方法和应用。所述BLyS抗体包括BLyS抗体的重链可变区重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和或BLyS抗体的轻链可变区轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，其氨基酸序列分别如本发明中所述。所述BLyS具有高亲和力，能明显在蛋白水平和细胞水平有效封闭BLyS蛋白，阻止BLyS蛋白与受体的结合。所述的BLyS抗体缺乏与人APRIL等同类蛋白抗原的交叉反应，并且具有良好的生物活性，其能抑制人BLyS诱导的小鼠B细胞的增殖。因此运用于预防或治疗与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物的制备中。

主权项：1.一种BLyS抗体，其特征在于，其包括以下互补决定区CDR：重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNO:34所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNO:35所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNO:36所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNO:38所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNO:39所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNO:40所示。

全文数据：一种BLyS抗体及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于抗体领域，具体地涉及一种BLyS抗体及其制备方法和应用。背景技术[0002]自体免疫疾病Autoimmunedisease为一种人体自身的免疫系统会攻击自己正常的器官、组织和细胞的疾病。它属于慢性病，一旦患上身体就会变得很虚弱，且无法治愈，只能控制。这导致患者需要承担高额的医疗费用并且生活质量急剧降低，从而对病人和他们的家庭甚至社会造成沉重的负担。大众比较熟悉的自体免疫疾病有系统性红斑狼疮Systemiclupuserythematosus，SLE或类风湿性关节炎（Rheumatoidarthritis,RA等多种疾病。SLE可能影响各种器官，目前无法预测其何时发病，其自然病程多表现为病情的加重和缓解交替。SLE的全球平均患病率为每10万人中有12-39人，我国人群患病率为每10万人中有30-70人，仅次于黑人（10010万），位居全球第二位。SLE通常发生于年轻女性，有90%的患者是女性。RA是一个主要影响关节的长期持续性疾病，它通常导致关节发热、肿胀和疼痛，严重时会导致关节表面侵蚀及破坏，甚至造成肢体畸形。据统计，类风湿性关节炎的发病率为0.3%左右。近年来，我国乃至全球的自体免疫疾病发病率呈逐渐上升趋势。由于我国幅员辽阔、人口众多，因此按此发病率计算出的病人数量相当巨大。然而，目前仍然缺乏非常有效、副作用小、特异性强的干预治疗手段来早期阻断靶器官的损伤进而改善病人的预后。[0003]研究表明，在自体免疫疾病和B细胞肿瘤的病人中能检测到B淋巴细胞刺激因子Blymphocytestimulator,BLyS表达水平的提高。例如，在系统性红斑狼疮SLE的多组病人中都发现血清中BLyS的表达水平增加，并且这和自体免疫抗体的产生及疾病活动指数相关[参见Stohletal.2003，ArthritisRheum，4812:3475;Petrietal.2008，ArthritisRheum,588:2453]。在类风湿性关节炎（RA病人的关节滑液（Synovialfluid中也发现高水平的BLyS[参见Tanetal.2003,ArthritisRheum，48⑷：982]。此}^的过表达和这些自体免疫疾病临床表现的相关性表明，调节BLyS的表达水平可以成为治疗这些疾病的新方法。[0004]BLyS，也被称为84??、1'说疆、了41^-1、了呖5?138或2了陬4，是肿瘤坏死因子〇'册）配体超家族的一员[参见Bakeretal·2003,ArthritisRheum,4811:3253]JLyS是由285个氨基酸组成的II型跨膜蛋白，有膜结合型和切割后具有152个氨基酸的可溶型两种形态。BLyS在单核细胞、巨噬细胞和树突细胞上都有表达并且在干扰素γ和白介素10刺激下表达水平上调。在体外，重组人BLyS可以通过与B细胞表面主要的受体结合，增强B细胞增殖和抗体分泌。在体内，重组人BLyS会导致小鼠的脾增生，这主要归因于成熟B细胞数目的增加。将BLyS注射到小鼠体内也会导致血清中抗体浓度的增加，以及针对T细胞依赖和非依赖抗原的体液免疫的增强。BLyS的过表达会产生表达水平异常高的抗体，从而导致SLE、RA及其它自体免疫疾病。[0005]近几年来，单克隆抗体药物由于其具有特异性强、疗效好、副作用小等优点，被越来越广泛地应用于对肿瘤、自体免疫疾病等的治疗中。单克隆抗体药物的全球年销售额从1997年的3亿美元发展到2012年的663亿美元，已经成为生物医药产业中发展速度最快、盈利能力最强的领域之一，具有广阔的发展空间。目前，针对BLyS的单克隆抗体Belimumab作为半个世纪以来第一个获得FDA批准的治疗SLE的单克隆抗体，具有非常重要的意义。[0006]尽管治疗SLE的单克隆抗体Belimumab还存在一些问题，但是与环磷酰胺和激素类等免疫抑制剂相比，单克隆抗体具有靶向性特点，副作用明显减少。预计到2022年，治疗SLE药物的销售额将达到39亿美元，市场潜力巨大。因此亟待获得全新的、更安全和更有效的针对BLyS的抗体来治疗SLE等自体免疫疾病。发明内容[0007]本发明所要解决的技术问题是为了克服目前缺少有效和安全的BLyS抗体的不足，提供一种亲和力高、特异性强的人源化或全人源的BLyS抗体及其制备方法和应用。本发明所述的BLyS抗体，与BLyS具有高度亲和力；能够抑制BLyS与其受体的结合;能够抑制人BLyS诱导的小鼠B细胞的增殖;并且缺乏与人APRIL等BLyS同族蛋白抗原的交叉反应，因此能够运用于制备治疗或预防自身免疫性疾病或肿瘤等与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物中。[0008]本发明人采用噬菌体展示和杂交瘤技术，获得BLyS抗体的先导抗体。再通过对先导抗体的初步生产、纯化和鉴定，获得具备抗体亲和力高亲和力KDl.0的阳性克隆扩增到24孔板，在含10%wwHT胎牛血清的DMEM在37°C、5%vvC02条件下扩大培养。培养3天后取24孔板中扩大培养的培养液进行离心，收集上清液，对上清液进行抗体亚型分析。其中，用ELISA确定对hBLyS-ECD的结合活性结合活性的检测方法请分别参见实施例3A和实施例3B，配体受体结合实验确定抗体样品对BLyS受体的封闭活性封闭活性的检测方法请分别参见实施例4。[0182]根据24孔板筛选结果，挑选ELISA实验中OD45〇r»1.0和配体受体结合实验中杂交瘤细胞培养上清对BLyS受体的封闭抑制率达到60%的杂交瘤细胞为符合条件的阳性克隆，选择符合条件的杂交瘤细胞用有限稀释法在96孔板进行亚克隆，在含10%wwFBS的DMEM培养基中（购自invitrogen37°C、5%vvC〇2条件下培养。亚克隆后10天用ELISA进行初步筛选，挑选单个阳性单克隆扩增到24孔板继续培养。3天后用受体配体结合实验评估生物活性。其中，评估标准为ELISA实验中OD45〇nm1.0，且配体受体结合实验中杂交瘤细胞培养上清对BLyS受体的封闭抑制率达到60%。[0183]根据24孔板样品检测结果，挑选出最优的克隆，并于含10%wwFBS的DMEM培养基中（购自invitrogen在37°C、5%vvC〇2条件下将该最优的克隆进行扩大培养，液氮冻存即得最优的杂交瘤细胞，并可用于后续的抗体生产和纯化。[0184]四）、先导抗体的生产和纯化[0185]由于杂交瘤细胞产生的抗体浓度较低，仅约1〜IOygmL且所得的抗体浓度变化较大;此外，培养基中细胞培养所产生的多种蛋白和培养基所含胎牛血清成分对很多生物活性分析方法都有不同程度的干扰，因此需要进行小规模1〜5mg的抗体生产纯化。[0186]将步骤（三）所得的杂交瘤细胞接种到T-75细胞培养瓶并用生产培养基Hybridomaserumfreemedium，购自Invitrogen公司）驯化传代3代。待其生长状态良好，接种细胞培养转瓶。每个2升的培养转瓶中加入500mL生产培养基，接种细胞密度为1.0XIO5个mL。盖紧瓶盖，将转瓶置于37°C培养箱中的转瓶机上，转速3转分钟。连续旋转培养14天后，收集细胞培养液，过滤去除细胞，并用0.45μπι的滤膜过滤至培养上清液澄清。澄清的培养上清液可马上进行纯化或置于_30°C冻存。[0187]用2mL蛋白G柱购自GEHealthcare纯化300mL杂交瘤细胞的澄清的培养上清液中的单克隆抗体。蛋白G柱先用平衡缓冲液PBS磷酸缓冲液，pH7.2平衡，然后将澄清的培养上清液上样到蛋白G柱，控制流速在3mL分钟。上样完毕后用平衡缓冲液清洗蛋白G柱，平衡缓冲液的体积为蛋白G柱的柱床体积的4倍。用洗脱液0.IM甘氨盐酸缓冲液，pH2.5洗脱结合在蛋白G柱上的单克隆抗体，用紫外检测器监测洗脱情况A280紫外吸收峰）。收集洗脱的单克隆抗体，加入10%vvI.OMTris-HCl缓冲液中和pH。然后立即用I3BS磷酸缓冲液透析过夜，第二天换液1次并继续透析3小时。收集透析后的单克隆抗体，用0.22μπι的滤器进行无菌过滤，无菌保存，即得纯化的BLyS抗体作为先导抗体。[0188]将纯化的BLyS抗体进行蛋白浓度Α2801.4、纯度、内毒Lonza试剂盒等检测分析，结果如表6所示。结果发现，先导抗体的内毒素浓度在I.OEUmg以内。[0189]表6纯化的BLyS抗体检测分析[0192]实施例2噬菌体展示技术制备BLyS抗体[0193]一）、BLyS蛋白的生物素化[0194]将Biotin-X-X-NHS购自SigmaAldrich和实施例1制备的免疫原hBLyS-ECD按摩尔比7:1的比例混合，室温放置30分钟后，加入终浓度为50mM的IMNH4Cl终止反应。然后用PBS磷酸缓冲液透析过夜来去除游离的生物素，得生物素化的免疫原（即生物素化的hBLyS-ECD。用BCA蛋白浓度测定试剂盒购自Pierce测定生物素化的hBLyS-ECD的浓度。[0195]生物素化的hBLyS-ECD的活性采用ELISA方法测定。将BLyS抗体购自GSK用I3BS稀释至lygmL，以50yL孔加入ELISA微孔板，4°C孵育过夜；用ELISA封闭液[含1%wvBSA和0.05%vvTween-20的I3BS磷酸缓冲液，pH7.4]37°C封闭2小时后，再加入梯度稀释的生物素化的hBLyS-E⑶，37°C温育1小时。加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶购自Sigma，商品号S5512，室温孵育30分钟。加入IOOyL孔TMB显色液，室温孵育15分钟后，加入5yLIN盐酸终止显色反应，用ELISA读板机读取0D45Qnm读数。结果如图4和表7所示，结果说明，生物素化的hBLyS-ECD可以结合BLyS抗体。[0196]表7ELISA检测生物素化的免疫原与BLyS抗体的结合[0197][0198]二）、噬菌体展示技术筛选BLyS抗体[0199]利用天然人的单链抗体（ScFv噬菌体展示库（由上海睿智化学研究有限公司构建筛选先导抗体。通过四轮生物淘选得到与BLyS结合的抗体。具体过程如下：[0200]将链霉亲和素用I3BS稀释至12.5ygmL，以ImL每管加入到免疫管中，4°C孵育过夜。用PBS洗涤免疫管3次后，在一半的免疫管中，每管加入50yg的步骤一）制得的生物素化的hBLyS-ECD，室温振荡1小时。PBS缓冲液洗涤3次之后，免疫管用10mL2%wv的封闭液[含有2%wv脱脂奶粉的PBS缓冲液]室温封闭2小时。同时，在另一半免疫管中，加入ImL噬菌体ScFv抗体库和封闭液，室温振荡2小时。并且设置对照管，加入同溶液体积的封闭液。将加入生物素化的hBLyS-ECD的免疫管和对照管中的封闭液倒掉，加入已经封闭好的噬菌体ScFv抗体库，室温振荡2小时。免疫管和对照管先用PBST[含有0.1%vvTween-20的I3BS缓冲液]洗涤5次，再用PBS缓冲液洗涤5次。其中，洗涤次数每一轮多增5次。洗涤后，每管加入ImL的10ygmL胰酶，37°C孵育30分钟来洗脱与生物素化的hBLyS-ECD结合的噬菌体。将ImL的胰酶溶液加到4mL处于对数生长期的大肠杆菌TGl购自LUCIGEN中，37°C孵育30分钟，得TGl的培养液。将TGl的培养液梯度稀释，涂布平板，37°C培养过夜。计算所得的与生物素化的hBLyS-E⑶结合的免疫管和对照管的克隆数，并挑选20〜30个克隆测序。[0201]同时，将平板上的克隆用2YT培养基2YT培养基的配制方法为:将IOg酵母提取物、16g胰蛋白胨和5gNaCl加入IL水中，再用NaOH调pH至7.0,高压灭菌洗涤、收集，并接种到新鲜培养基中，37°C培养至对数期。加入辅助噬菌体M13K07购自NEB，货号N0315S，混匀，37°C静置30分钟。然后37°C振荡培养30分钟，4000rpm离心10分钟后收集细胞，加入新鲜培养基，30°C振荡培养4小时。4000rpm离心30分钟，收集上清，加入上清体积的14体积的含有5XPEG的2.5M的NaCl溶液，放置冰上过夜。4000rpm，4°C离心30分钟，收集噬菌体沉淀，溶解在PBS缓冲液中。IOOOOrpm离心10分钟去除残留的细胞碎片，收集上清用于下一轮的生物淘选。[0202]用ELISA方法确定筛选得到的scFv抗体具有与BLyS蛋白的结合活性。将OD45〇r»l.0的克隆挑选出来进行测序，得到具有不同HCDR3序列的克隆。然后再通过FACS和配体受体结合实验，选择FACS实验中MFI值30并且在配体受体结合实验中细胞裂解上清对BLyS受体的封闭抑制率达到60%的克隆作为符合条件的阳性克隆。[0203]三）、抗体的生产和纯化[0204]根据阳性克隆的测序结果具体参见下述实施例7，设计引物具体引物序列如表8所示通过PCR方法分别扩增轻链和重链可变区。配置50yL反应体系，包括0.5yL含有转染阳性克隆大肠杆菌TGl中提取的质粒）、每种引物10pm〇l、0.5yLDNA聚合酶以及相配的缓冲体系。设置PCR程序，预变性95°C2分钟，变性95°C15秒，退火55°C30秒，延伸68°C45秒，30个循环后再额外于68°C延伸10分钟，得PCR产物。其中PCR所用的DNA聚合酶，购自Invitrogen，货号12344;缓冲体系为该DNA聚合酶配套购买使用的缓冲体系。取5yLPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将检测阳性样品使用柱回收试剂盒纯化，其中回收试剂盒为NucleoSpin®GelPCRClean-up，购自MACHEREY-NAGEL，货号740609。进行连接反应:插入片段3yL，酶切过的表达载体0.5yL，重组酶Exnase0.5yL，缓冲液2yL，反应体系IOyL，于37°C反应半小时得连接产物，即构建好的重组载体。其中，重组酶购自Vazyme，货号Cl12-0102;缓冲液为该重组酶配套购买使用的重组酶;将重链可变区定向克隆到包含信号肽和人源抗体重链IgGl恒定区的表达载体其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成），将轻链可变区定向克隆到包含信号肽和人源抗体轻链kappa或lambda仅针对下述L1D12抗体的轻链恒定区的表达载体其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成）中。将IOyL连接产物加入50yL的感受态细胞EcoslOlcompetentcells，购自Yeastern，货号FYE607中，冰浴30分钟。再于42°C水浴热激1分钟，放回冰上2分钟后加入500yL无抗生素的2YT培养基，于37°C摇床上以200RPM的速度复苏45分钟，取出200yL涂布于含100ygmL氨苄青霉素的LB固体培养基上于37°C孵箱过夜培养。次日，使用表达载体上引物PTT-EFla-F和pSV40其核苷酸序列分别为序列表SEQIDNo.134〜135所示），配置30yLPCR体系，进行菌落PCR。菌落PCR的体系为：引物各IyL，10yL的PCR预混液购自Novoprotein，用水补足到20yL。用移液器枪头蘸取菌落于PCR反应体系中吹吸，并吸出〇.5yL点于另一块含lOOygmL氨苄青霉素的LB固体培养皿上以保存菌株。PCR反应结束后，取出5yL进行琼脂糖凝胶电泳检测，将阳性样品进行测序和分析[参见Kabat，“SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,’’NationalInstitutesofHealth，Bethesda，Md.1991]。[0205]表8阳性克隆的引物序列编号[0206][0208]经过菌落PCR验证，将上述序列正确的重组抗体轻、重链的表达载体瞬时转染到Freestyle™293-F细胞购自Invitrogen中来生产抗体。在转染的时候，293-F细胞的密度应为1-1.5XIO6个mL，并且IOOmL细胞需要IOOyg上述已构建好的载体DNA其中，重组轻链载体和重链载体的质量比为3:2和200yg的转染试剂聚乙烯亚胺PEI。将载体DNA和PEI分别加入到培养基中，室温静置5分钟，0.22μπι滤膜过滤后，将载体DNA和PEI混合得混合物，室温静置15分钟。然后将上述混合物缓慢地加入到细胞中，在37°C、8%vvC02培养箱中以120rpm的转速培养。转染后的第二天，加入0.5%vv蛋白胨到细胞的培养液中。6-7天后，3500g离心细胞的培养液30分钟，收集上清液，0.22μπι滤器过滤。[0209]200mL澄清的上清液中的单克隆抗体用ImL蛋白A柱购自GEHealthcare纯化。蛋白A柱先用平衡缓冲液PBS磷酸缓冲液，pH7.2平衡，然后将上清液上样到蛋白A柱，控制流速在3mL分钟。上样完毕后用平衡缓冲液清洗蛋白A柱，平衡缓冲液的体积为蛋白A柱的柱床体积的5倍。用洗脱液0.IM甘氨盐酸缓冲液，pH3.0洗脱结合在蛋白A柱上的BLyS抗体，用紫外检测器监测洗脱情况A280紫外吸收峰）。收集洗脱的抗体，加入10%vvI.OMTris-HCl缓冲液中和pH，然后立即用PBS磷酸缓冲液透析过夜，第二天换液1次并继续透析3小时。收集透析后的BLyS抗体，用0.22μπι的滤器进行无菌过滤，无菌保存，即得纯化的BLyS抗体作为先导抗体。[0210]将先导抗体进行蛋白浓度Α2801.4、纯度、内毒Lonza试剂盒等检测分析。结果如表9所示，结果显示，先导抗体内毒素浓度在I.OEUmg以内。[0211]表9纯化的BLyS抗体检测分析[0212][0213]实施例3先导抗体的检定[0214]A、酶联免疫吸附实验ELISA检测抗体与BLyS蛋白的结合[0215]将实施例1和2所得的先导抗体进行与人BLyS蛋白和BLyS蛋白所在家族的人APRIL蛋白分别进行交叉反应。[0216]先将链霉亲和素用I3BS稀释到终浓度1.0ygmL，然后以50yL每孔加到96孔ELISA板，用塑料膜封好4°：孵育过夜。第二天用洗板液[含有0.05%^八1'«的1120的？85缓冲液]洗板4次，加入封闭液[含有0.05%vVTween20和1%wwBSA的I3BS缓冲液]，37°C封闭2小时。倒掉封闭液，将实施例2获得的生物素化的hBLyS-E⑶用PBS稀释到终浓度50ngmL，然后以50yL每孔加到96孔ELISA板，37°C孵育1小时。用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次后，每孔加入实施例1和2所得的纯化的先导抗体IOOyLWC孵育1小时后，用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次。加入HRP辣根过氧化物酶）标记的二抗购自Sigma，37°C孵育1小时后，用洗板液[含有0.05%vvTween20的I3BS缓冲液]洗板4次。每孔加入IOOyLTMB底物，室温孵育5分钟后，每孔加入IOOyL终止液（I.ONHC1。用ELISA读板机SpectraMaxM5e，购自MolecularDevice读取A45〇nm数值，结果如图5A〜图5B和表10所示，表10说明，纯化后的抗体与BLyS重组蛋白在ELISA水平结合。其中表中的数据为OD45Qnm值。[0217]表10ELISA检测BLyS纯化抗体与生物素化的hBLyS-ECD的结合反应[0218][0219]检测BLyS抗体是否与人APRIL蛋白有交叉反应时，先将APRIL蛋白（购自RDSystems用PBS稀释到终浓度1.0ygmL，然后以50yL每孔加到96孔ELISA板，用塑料膜封好4°C孵育过夜。第二天用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次，加入封闭液[含有0.05%vvTween20和1%wwBSA的I3BS缓冲液]，37°C封闭2小时。倒掉封闭液，加入实施例1和2所得的先导抗体IOOyL每孔。37°C孵育1小时后，用洗板液[含有0.05%vVTween20的I3BS缓冲液]洗板4次。加入HRP辣根过氧化物酶标记的二抗购自Sigma，37°C孵育1小时后，用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次。每孔加入100μLTMB底物，室温孵育5分钟后，每孔加入IOOyL终止液（I.ONHC1。用ELISA读板机SpectraMaxM5e，购自MolecularDevice读取A45〇nm数值，结果如图6A〜图6B和表11所示，表11说明，先导抗体与BLyS蛋白同家族的APRIL重组蛋白在ELISA水平不结合。其中IgG对照为人IgG，表中的数据为0D45Ut。[0220]表11-1ELISA检测BLyS抗体与APRIL蛋白的结合反应[0221][0222]表11-2ELISA检测BLyS抗体与APRIL蛋白的结合反应[0223][0224]B、流式细胞实验FACS检测抗体与BLyS表达细胞的结合[0225]将实施例1步骤二）获得的CHO-KlhBLyS稳定细胞株和CHO-KlcynoBLyS稳定细胞株在T-175细胞培养瓶中扩大培养至90%汇合度。吸尽培养基，用PBS缓冲液（购自Invitrogen洗涤1次，然后用细胞解离液（TrypLE™ExpressEnzymeJQgLifetechnology公司）处理和收集细胞。具体步骤为：用PBS缓冲液洗涤细胞1次，进行细胞计数后将细胞用PBS缓冲液稀释至2XIO6个细胞每毫升，加入2%ww胎牛血清封闭液，冰上孵育30分钟。按每孔200yL加入到96孔FACS反应板中，4°C离心2000rpm后，每孔加入IOOyL实施例1和2所得的先导抗体，冰上孵育1小时。用FACS缓冲液[含有2%wwFBS的PBS缓冲液]离心洗涤2次，加入每孔IOOyL焚光Alexa488标记的二抗购自Invitrogen，冰上孵育1小时。用FACS缓冲液离心洗涤3次。用200yLFACS缓冲液悬浮细胞，用FACSFACSCalibur，购自BD公司）检测和分析结果。结果如图7〜8和表12〜13所不，表12〜13说明，先导抗体可结合细胞表面的人BLyS蛋白，且先导抗体和猴BLyS存在交叉反应。其中表中的数据为MFI所测细胞群的平均荧光强度值。[0226]表12流式细胞分析实验检测BLyS抗体与人BLyS重组细胞CHO-KlhBLyS的结合反应[0227][0228]表13流式细胞分析实验检测BLyS抗体与猴BLyS重组细胞CH0-K1cynoBLyS的结合反应[0229][0230][0231]C.BLyS抗体亲和常数的测定[0232]使用BiacoreXlOO仪器购自GEHealthcare进行亲和常数的测定。具体操作和方法根据仪器说明书和厂家提供的详细方法。具体为：用CM5芯片（SensorChipCM5,购自GEHealthcare进行亲和力测定。首先将CM5芯片依次用50mM的NaOH和按体积比1:1混合的50mMNHS及200mMEDC活化，然后将抗人Fc片段抗体购自Genway用IOmM的醋酸钠缓冲液pH5.0稀释至16.4ygml，与CM5芯片进行偶联反应。随后注入IM乙醇胺对剩余的活化位点进行封闭。待测抗体（即实施例2制备的全人源BLyS抗体被芯片捕获后，注入7个不同浓度梯度稀释的实施例1制备的免疫原（即hBLyS-ECD，通过Biacore仪器来检测抗体与抗原结合与解离。然后用BiacoreXlOOEvaluationSoftware2.0软件拟合得到解离常数与结合常数，亲和力常数为解离常数与结合常数的比值。结果如表14所示，说明BLyS抗体对hBLyS-ECD具有高亲和力。[0233]表14BLyS抗体对hBLyS-ECD的亲和常数[0234][0235][0236]实施例4检测BLyS纯化抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFFR的结合[0237]通过BLyS蛋白的受体配体结合试验检测BLyS抗体阻断BLyS蛋白与其受体MFFR的结合。[0238]将MFFR购自RDSystems以50ng每孔加到96孔ELISA板中，塑料膜封好4°C孵育过夜。第二天用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次，加入封闭液[含有0.05%vvTween20和2%wwBSA的I3BS缓冲液]室温封闭1小时。倒掉封闭液，每孔先加入50yL实施例1和2所得的先导抗体，后加入实施例2制备的生物素化的hBLyS-E⑶每孔50yL，混匀后37°C孵育1小时。用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次。加入HRP辣根过氧化物酶标记的亲和素购自Sigma稀释液每孔100yL，37°C孵育1小时后，用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次。每孔加入IOOyLTMB底物，室温孵育5分钟后，每孔加入IOOyL终止液（I.ONHC1。用ELISA读板机（SpectraMax384plus，MolecularDevice读取A45〇nm数值，结果如图9A〜图9B和表15所示。表15说明，BLyS抗体能封闭BLyS蛋白与其受体BAFFR的结合。[0239]表15-1BLyS抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFFR的结合[0240][0241]表15-2BLyS抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFFR的结合[0242][0243]实施例5小鼠B细胞增殖实验检测BLyS纯化抗体阻断人或鼠BLyS蛋白对B细胞增殖的作用[0244]一小鼠脾脏分离B细胞[0245]将新鲜获取的小鼠脾脏研磨后，用含有10%ww胎牛血清的RPMI1640培养基购自Invitrogen，货号:A10491重悬，70μηι细胞滤网（购自BD过滤后，以I，500rpm转速4°C离心5分钟。弃上清，将细胞沉淀漩涡振荡15秒，加入红细胞裂解缓冲液购自Sigma，室温静置5分钟。用含有10%ww胎牛血清的RPMI1640培养基补足到15mL，1500rpm转速4°C离心5分钟，得上清。上清用40μπι细胞滤网（购自BD过滤，得过滤后的上清，然后进行细胞计数。小鼠B细胞分离采用试剂盒购自MiltenyiBiotec，实验操作严格按照试剂盒说明书要求。具体实验简述如下:将过滤后的上清以300g转速4°C下离心10分钟，弃上清。每IO7个细胞中加入40yL缓冲液[含有0.5%wvBSA和2mMEDTA的I3BS缓冲液]和IOyL该试剂盒中的结合非B细胞的生物素化的抗体混合物，混合后4°C孵育5分钟。每IO7个细胞中继续加入30yL缓冲液[含有0.5%wvBSA和2mMEDTA的PBS缓冲液]和20yL抗生物素标记的磁珠（购自MiltenyiBiotec，混合之后再4°C孵育10分钟，得细胞悬液。用缓冲液将体积补足到500μL。将LS分离柱购自MiltenyiBiotec放置在磁力架上，先加入3mL缓冲液润洗，再加入细胞悬液，收集流穿液，即未被标记的被富集的B细胞悬液。再加入3mL缓冲液，收集流穿液，并与上一步的流穿液合并，即得分离自小鼠脾脏的B细胞。[0246]二小鼠B细胞增殖实验[0247]将实施例5步骤一获得的B细胞以5IO4个细胞50yL每孔铺至96孔细胞培养板，加入2ygml的Fab’）2片段化山羊抗小鼠IgM二抗（购自JacksonImmunoResearch、IOngml的实施例1制备的免疫原hBLyS-ECD或鼠BLyS蛋白（购自RDSystems和不同浓度的实施例1或2制备的先导抗体的溶液，保证每个反应孔IOOyL体积。将反应板于37°C、5%vvCO2培养箱培养72小时后检测活细胞数。活细胞数目测定采用CdlTitcr-GIokLuminescentCellViabilityAssay试剂盒购自Promega，实验操作严格按照试剂盒说明书要求。具体实验简述如下：在测定前将96孔板放在室温平衡30分钟，加入与细胞培养基等体积的ceimter_Gic®试剂，放置在摇床2分钟以诱导细胞裂解，再将孔板放置在室温10分钟来稳定发光信号，最后用读板机SpectraMax384plus,MolecularDevice读取数值。[0248]检测BLyS抗体在实施例5步骤二所述实验中对小鼠B细胞增殖的影响。结果如图10〜11和表16〜17所示，图10说明，待测抗体可抑制hBLyS-E⑶刺激引起的小鼠B细胞增殖。图11说明，待测抗体除L9G7可以抑制鼠BLyS诱导的小鼠B细胞增殖以外，与鼠BLyS无交叉反应。[0249]表16BLyS抗体对hBLyS-ECD刺激的小鼠B细胞增殖的抑制[0250][0251]表17BLyS抗体对鼠BLyS刺激的小鼠B细胞增殖的抑制[0252][0253]实施例6BLyS抗体结合抗原表位的鉴定[0254]将纯化的全人源BLyS抗体和杂交瘤抗体进行竞争性酶联免疫吸附实验，分析不同抗体所结合的抗原表位。[0255]先将纯化的BLyS抗体用PBS稀释到终浓度1.0ygmL，然后以50yL每孔加到96孔ELISA板，用塑料膜封好4°C孵育过夜。第二天用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次，加入封闭液[含有0.05%vVTween20和1%wwBSA的I3BS缓冲液]，37°C封闭1小时。倒掉封闭液，将竞争性的抗体及IgG对照用PBS稀释到终浓度40ygmL，然后以50yL每孔加到96孔ELISA板。再将生物素化的hBLyS-ECD用PBS稀释到终浓度2ngmL，然后以50yL每孔加到96孔ELISA板。保证竞争性抗体以及hBLyS-ECD的终浓度分别为20ygmL，lngmL。37°C孵育1小时后，用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的PBS缓冲液]洗板4次。加入HRP辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素购自Sigma，每孔100μΙ^37Γ孵育1小时后，用洗板液[含有0.05%vvTWeen20的I3BS缓冲液]洗板4次。每孔加入IOOyLTMB底物，室温孵育5分钟后，每孔加入IOOyL终止液（I.ONHC1。用ELISA读板机（SpectraMaxM5e，购自MolecularDevice读取A45〇nm数值。结果如表18A〜表18B所示，说明BLyS抗体之间存在不同程度的竞争性，即结合不同的抗原表位。其中表中的数据为加入竞争性抗体后，对原抗体与hBLyS-ECD结合水平的抑制率（％。[0256]表18ABLyS全人源抗体竞争与hBLyS-ECD的结合「02571[0258]表18BBLyS纯化抗体竞争与hBLyS-ECD的结合[0259][0260]实施例7轻重链可变区氨基酸序列测定及鼠-人嵌合抗体的制备[0261]总RNA分离:将实施例1所选的先导抗体所对应的亚克隆培养所得的上清液检验过抗原结合后（即经过实施例3〜5的检定和活性测定后），通过离心搜集5XIO7个杂交瘤细胞，加入ImLTrizo1混勾并转移到1.5mL离心管中，室温静置5分钟；加0.2mL氯仿，振荡15秒，静置2分钟后于4°C，12000g离心5分钟，取上清转移到新的1.5mL离心管中；加入0.5mL异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10分钟后于4°C，12000g离心15分钟，弃上清;加入ImL75%vv乙醇，轻轻洗涤沉淀，4°C，12000g离心5分钟后弃上清，将沉淀物晾干，加入DEPC处理过的H2O溶解55°C水浴促进溶剂10分钟），即得总RNA。[0262]逆转录与PCR:取Iyg总RNA，配置20μ1体系，加入逆转录酶后于42°C反应60分钟，于85°C反应10分钟终止反应。配置50yLPCR体系，包括IyLcDNA、每种引物25pmol、lyLDNA聚合酶以及相配的缓冲体系、250ymoldNTPs;设置PCR程序，95°C预变性3分钟，95°C变性30秒，55°C退火30秒，72°C延伸35秒，35个循环后再额外于72°C延伸5分钟，得PCR产物。其中逆转录所用的试剂盒为PrimeScriptRTMasterMix，购自Takara，货号RR036;PCR所用的试剂盒包括Q5超保真酶，购自NEB，货号M0492。[0263]克隆与测序:取5yLPCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将检测阳性样品使用柱回收试剂盒纯化，其中回收试剂盒为NliCleoSpin⑮GelPCRClean-up，购自MACHEREY-NAGEL，货号740609。进行连接反应:样品50ng，T载体50ng，连接酶0.5yL，缓冲液IyL，反应体系10μL，于16°C反应半小时得连接产物，其中连接的试剂盒为T4DNA连接酶，购自NEB，货号Μ0402;取5yL连接产物加入IOOyL的感受态细胞EcosIOlcompetentcells,购自Yeastern，货号FYE607中，冰浴5分钟，而后于42°C水浴热激1分钟，放回冰上1分钟后加入650yL无抗生素SOC培养基，于37°C摇床上以200RPM的速度复苏30分钟，取出200yL涂布于含抗生素的LB固体培养基上于37°C孵箱过夜培养;次日，使用T载体上引物M13F和M13R配置30yLPCR体系，进行菌落PCR，用移液器枪头蘸取菌落于PCR反应体系中吹吸，并吸出0.5yL点于另一块含lOOygmL氨苄青霉素的LB固体培养皿上以保存菌株;PCR反应结束后，取出5yL进行琼脂糖凝胶电泳检测，将阳性样品进行测序和分析[参见Kabat，“SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,’’NationalInstitutesofHealth，Bethesda，Md.1991]〇测序结果如表19〜20所示。[0264]本发明噬菌体制备的全人源BLyS抗体的克隆和测序请参见实施例2第三部分，表19、20也包含了这部分测序结果。[0265]表19BLyS抗体氨基酸序列编号[0266][0267]其中，表19中的数字即为序列表中序列号，如2-1G11的重链蛋白可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.1，而2-1G11的重链蛋白可变区中CDRl的氨基酸序列为SEQIDNo.2。[0268]表20BLyS抗体基因核苷酸序列编号[0271]其中，表20中的数字即为序列表中序列号，如编码2-1G11的重链蛋白可变区的氨基酸序列的核苷酸序列为SEQIDNo.105,而编码2-1G11的轻链蛋白可变区的氨基酸序列的核苷酸序列为SEQIDNo.106。[0272]编码2-1G11的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.105中的第76位至第105位；[0273]编码2-1G11的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.105中的第148位至第198位；[0274]编码2-1G11的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.105中的第295位至第342位；[0275]编码2-1G11的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.106中的第70位至第102位；[0276]编码2-1G11的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.106中的第148位至第168位；[0277]编码2-1G11的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.106中的第265位至第291位；[0278]编码L9G7的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.107中的第76位至第105位；[0279]编码L9G7的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.107中的第148位至第198位；[0280]编码L9G7的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.107中的第295位至第342位；[0281]编码L9G7的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.108中的第70位至第102位；[0282]编码L9G7的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.108中的第148位至第168位；[0283]编码L9G7的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.108中的第265位至第291位；[0284]编码L1D12的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.109中的第76位至第105位；[0285]编码L1D12的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.109中的第148位至第195位；[0286]编码L1D12的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.109中的第292位至第330位；[0287]编码L1D12的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.110中的第67位至第99位；[0288]编码L1D12的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.110中的第145位至第165位；[0289]编码L1D12的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.110中的第262位至第297位。[0290]编码35E6F7C3的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.111中的第76位至第105位；[0291]编码35E6F7C3的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.lll中的第148位至第198位；[0292]编码35E6F7C3的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.lll中的第295位至第321位；[0293]编码35E6F7C3的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.112中的第70位至第99位；[0294]编码35E6F7C3的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.ll2中的第145位至第165位；[0295]编码35E6F7C3的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.ll2中的第262位至第288位。[0296]编码8E7D9C7F5的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.113中的第76位至第105位；[0297]编码8E7D9C7F5的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.113中的第148位至第198位；[0298]编码8E7D9C7F5的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.113中的第295位至第342位；[0299]编码8E7D9C7F5的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.114中的第70位至第114位；[0300]编码8E7D9C7F5的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.114中的第160位至第180位；[0301]编码8E7D9C7F5的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.114中的第277位至第303位。[0302]编码20D1B6E9E5的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.115中的第76位至第105位；[0303]编码20D1B6E9E5的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.115中的第148位至第198位；[0304]编码20D1B6E9E5的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.115中的第295位至第339位；[0305]编码20D1B6E9E5的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.116中的第70位至第117位；[0306]编码20D1B6E9E5的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.116中的第163位至第183位；[0307]编码20D1B6E9E5的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.116中的第280位至第306位。[0308]编码78C11D2D12的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.117中的第76位至第105位；[0309]编码78C11D2D12的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.117中的第148位至第198位；[0310]编码78C11D2D12的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.117中的第295位至第315位；[0311]编码78C11D2D12的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.118中的第70位至第99位；[0312]编码78C11D2D12的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.118中的第145位至第165位；[0313]编码78C11D2D12的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.118中的第262位至第288位。[0314]编码89A2G5E7的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.119中的第76位至第105位；[0315]编码89A2G5E7的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.ll9中的第148位至第195位；[0316]编码89A2G5E7的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.ll9中的第292位至第327位；[0317]编码89A2G5E7的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.120中的第70位至第105位；[0318]编码89A2G5E7的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l20中的第151位至第171位；[0319]编码89A2G5E7的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l20中的第268位至第294位。[0320]编码97E7B3F2的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.121中的第76位至第105位；[0321]编码97E7B3F2的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l21中的第148位至第198位；[0322]编码97E7B3F2的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l21中的第295位至第321位；[0323]编码97E7B3F2的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.122中的第70位至第117位；[0324]编码97E7B3F2的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l22中的第163位至第183位；[0325]编码97E7B3F2的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l22中的第280位至第306位。[0326]编码97A3C2H4的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.123中的第76位至第105位；[0327]编码97A3C2H4的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l23中的第148位至第198位；[0328]编码97A3C2H4的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l23中的第295位至第327位；[0329]编码97A3C2H4的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.124中的第70位至第102位；[0330]编码97A3C2H4的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l24中的第148位至第168位；[0331]编码97A3C2H4的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.l24中的第265位至第291位。[0332]编码67A2E1D10的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.125中的第76位至第105位；[0333]编码67A2E1D10的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.125中的第148位至第198位；[0334]编码67A2E1D10的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.125中的第295位至第333位；[0335]编码67A2E1D10的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.126中的第70位至第102位；[0336]编码67A2E1D10的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.126中的第148位至第168位；[0337]编码67A2E1D10的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.126中的第265位至第291位。[0338]编码111D10D6G3的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.127中的第76位至第105位；[0339]编码111D10D6G3的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.127中的第148位至第198位；[0340]编码111D10D6G3的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.127中的第295位至第309位；[0341]编码111D10D6G3的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.128中的第70位至第102位；[0342]编码111D10D6G3的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.128中的第148位至第168位；[0343]编码111D10D6G3的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.128中的第265位至第291位；[0344]编码93C6F10D3的重链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.129中的第76位至第105位；[0345]编码93C6F10D3的重链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.129中的第148位至第198位；[0346]编码93C6F10D3的重链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.129中的第295位至第336位；[0347]编码93C6F10D3的轻链蛋白可变区中CDRl的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.130中的第70位至第102位；[0348]编码93C6F10D3的轻链蛋白可变区中CDR2的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.130中的第148位至第168位；[0349]编码93C6F10D3的轻链蛋白可变区中CDR3的核苷酸序列为序列表SEQIDNo.130中的第265位至第291位。[0350]小鼠-人嵌合BLyS抗体的制备:根据上步的测序结果得到了抗体重链可变区和轻链可变区序列。小鼠-人嵌合BLyS抗体的生产和制备参考实施例2中的第三步骤，即；[0351]1、重组载体制备:将重链可变区定向克隆到包含信号肽和人源抗体重链IgGl恒定区的表达载体其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成），将轻链可变区定向克隆到包含信号肽和人源抗体轻链kappa恒定区的表达载体其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成）；2、细胞转染;3、抗体纯化。并对所获BLyS嵌合抗体进行特性鉴定方法参见实施例3〜5。制得的各嵌合抗体命名在对应的先导抗体克隆号前加上首字符“c”，例如嵌合抗体C8E7D9C7F5对应的先导抗体克隆号为8E7D9C7F5。[0352]结果如图12和表21所示，表21说明，嵌合抗体与BLyS重组蛋白在ELISA水平结合。其中表中的数据为〇D45Qnm值。[0353]表21ELISA检测BLyS嵌合抗体与生物素化的hBLyS-ECD的结合反应[0354][0355]通过Biacore仪器来检测抗体与抗原结合与解离。结果如表22所示，说明BLyS嵌合抗体对hBLyS-E⑶具有高亲和力。[0356]表22BLyS嵌合抗体对hBLyS-ECD的亲和常数[0359]结果如图13和表23所示。表23说明，BLyS嵌合抗体能封闭BLyS蛋白与其受体MFFR的结合。其中表中的数据为OD45qim值。[0360]表23BLyS嵌合抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFFR的结合[0361][0362]结果如图14和表24所示。表24说明，BLyS嵌合抗体可以抑制hBLyS-ECD刺激引起的小鼠B细胞增殖。[0363]表24BLyS嵌合抗体对hBLyS-ECD刺激的小鼠B细胞增殖的抑制[0364][0365]实施例8小鼠体内检测BLyS抗体的中和活性[0366]雌性BALBc小鼠（8-9周龄，购自上海灵畅生物科技有限公司）接收后在SPF级饲养，适应1周后，开始实验。小鼠在第一天及第三天静脉注射实施例2和6制备的全人源或人鼠嵌合BLyS单克隆抗体（在免疫原注射1小时前），克隆号分别为2-1G11、LlDl2、c8E7D9C7F5、C20D1B6E9E5、c35E6F7C3、c97A3C2H4、C93C6F10D3和c111D10D6G3，剂量为3mgkg。第一天到第四天每天通过皮下注射实施例1制备的免疫原hBLyS-ECD进行刺激诱导，剂量为〇.3mgkg。第五天将所有动物杀死，测量小鼠脾脏重量、B细胞在脾细胞中所占的比例和血清中IgA的的浓度。[0367]部分实验结果见图15A〜图15C和表25。IgG对照为人IgG。实验结果表明BLyS抗体能降低由hBLyS-ECD刺激所引起的小鼠脾细胞中B细胞比例的增加。[0368]表25-1BLyS抗体对hBLyS-E⑶刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响[0369][0370]表25-2BLyS抗体对hBLyS-E⑶刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响[0371][0372]表25-3BLyS抗体对hBLyS-E⑶刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响[0373][0374]实施例9人源化BLyS抗体的制备及鉴定[0375]在Germline数据库中选取与上述嵌合抗体C8E7D9C7F5或C97A3C2H4的非CDR区匹配最好的人种系抗体重链和轻链可变区模板。人源化BLyS抗体的序列选自人种系外显子VH、JH、Vk和Jk序列。其中c8E7D9C7F5抗体重链可变区的模板为人种系抗体重链VH外显子的Vh1_18，Jh外显子的Jh-6,轻链可变区的模板为人种系抗体轻链Vk外显子的B3，JK外显子的Jk_4。其中c97A3C2H4抗体重链可变区的模板为人种系抗体重链Vh外显子的Vh3_7，Jh外显子的Jh_6,轻链可变区的模板为人种系抗体轻链Vk外显子的AlO，Jk外显子的Jk_4。[0376]根据Kabat定义确定的嵌合抗体C8E7D9C7F5或C97A3C2H4的重链和轻链CDR分别移植到所选人种系模板中，替换人种系模板的CDR区，得到人源化的抗体。然后，以鼠源抗体的三维结构为基础，对包埋残基、与CDR区有直接相互作用的残基，以及对Vh和Vl的构象有重要影响的构架区的残基进行回复突变，得到人源化之后的抗体。[0377]人源化BLyS抗体变体的重链和轻链可变区与嵌合抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列比对如表26所示。其中人源化BLyS抗体h8E7D9C7F5变体的重链可变区序列分别为SEQIDNo.140,SEQIDNo.141，SEQIDNo.142,SEQIDNo.143,SEQIDNo.144,SEQIDNo.145,SEQIDNo.146,轻链可变区序列分别为SEQIDNo.147,SEQIDNo.148。人源化BLyS抗体h97A3C2H4变体的重链可变区序列分别为SEQIDNo.l49，SEQIDN〇.150，SEQIDNo.l51，SEQIDΝο·152,轻链可变区序列分别为SEQIDNo.l53，SEQIDNo.l54，SEQIDNo.l55，SEQIDNo.l56，SEQIDNo.157。[0378]人种系重链可变区模板Vh1_18Jh6SEQIDN0.136[0379]Vh1-18：[0380]QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISffVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR；[0381]Jh6：WGQGTTVTVSS〇[0382]人种系轻链可变区模板B3JK4SEQIDN0.137[0383]B3：[0384]DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC；[0385]Jk4:FGGGTKVEIK。[0386]人种系重链可变区模板Vh3-7Jh6SEQIDN0.138[0387]Vh3-7：[0388]EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEffVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR；[0389]Jh6：WGQGTTVTVSS〇[0390]人种系轻链可变区模板A10JK4SEQIDN0.139[0391]A10：[0392]EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYC；[0393]Jk4:FGGGTKVEIK。[0394]表26-1人源化BLyS抗体h8E7D9C7F5与嵌合抗体c8E7D9C7F5可变区的序列比对[0395][0396][0397]表26-2人源化BLyS抗体h97A3C2H4与嵌合抗体C97A3C2H4可变区的序列比对[0398][0399][0400]人源化BLyS抗体变体的重链和轻链可变区的核苷酸序列如表27所示。其中人源化BLyS抗体h8E7D9C7F5变体的重链可变区核苷酸序列分别为SEQIDNo.158,SEQIDNo.159,SEQIDNo.160,SEQIDNo.161,SEQIDNo.162,SEQIDNo.163,SEQIDNo.164,轻链可变区核苷酸序列分别为SEQIDNo.l65，SEQID如.166。人源化^^3抗体11974302!14变体的重链可变区核苷酸序列分别为SEQIDNo.l67，SEQIDNo.l68，SEQIDNo.l69，SEQIDNo.170,轻链可变区核苷酸序列分别为SEQIDNo.171，SEQIDNo.172，SEQIDNo.l73，SEQIDNo.l74，SEQIDNo.175。[0401]表27-1人源化BLyS抗体h8E7D9C7F5可变区核苷酸的序列编号[0402][0403]表27-2人源化BLyS抗体h97A3C2H4可变区核苷酸的序列编号[0404][0405]根据人源化Vh或Vl结构域合成的重叠寡核苷酸，利用PCR重叠延伸来组装各结构域。利用掺入PCR产物的限制性位点将Vh结构域定向克隆到包含信号肽和人源抗体重链IgGl恒定区的表达载体其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成），将I结构域定向克隆到包含信号肽和人源抗体轻链kappa恒定区的表达载体其中表达载体购买自Invitrogen，重组步骤由上海睿智化学研究有限公司完成）中，得到的重组质粒经过测序验证，抽提高纯度的重组质粒，经〇.22μπι滤膜过滤，供转染使用。人源化BLyS抗体的生产和制备参考实施例2中的第三步骤，并对所获BLyS抗体进行特性鉴定见实施例3〜5,7。[0406]结果如图16和表28所示，表28说明，人源化抗体与BLyS重组蛋白在ELISA水平结合。其中表中的数据为〇D45Qnm值。[0407]表28ELISA检测人源化抗体与生物素化的hBLyS-ECD的结合反应[0408][0409][0410]通过Biacore仪器来检测抗体与抗原结合与解离。结果如表29所示，说明BLyS人源化抗体对hBLyS-E⑶具有高亲和力。[0411]表29BLyS人源化抗体对hBLyS-ECD的亲和常数[0413]结果如图17和表30所示。表30说明，BLyS人源化抗体能封闭BLyS蛋白与其受体BAFFR的结合。其中表中的数据为0D45U直。[0414]表30BLyS人源化抗体阻断BLyS蛋白与其受体BAFFR的结合[0415][0416]结果如图18和表31所示。表31说明，BLyS人源化抗体可以抑制hBLyS-ECD刺激引起的小鼠B细胞增殖。[0417]表31BLyS人源化抗体对hBLyS-E⑶刺激的小鼠B细胞增殖的抑制[0418][0419][0420]同时，在小鼠体内检测BLyS人源化抗体的中和活性。实验结果见图19A〜19B和表32。实验结果表明BLyS人源化抗体能降低由hBLyS-ECD刺激所引起的小鼠脾细胞中B细胞比例的增加，同时有效抑制血清中IgA水平。[0421]表32-1BLyS人源化抗体对hBLyS-E⑶刺激后的小鼠B细胞在脾细胞中所占比例的影响[0422][0423]表32-2BLyS人源化抗体对小鼠血清中IgA浓度的影响[0424][0425]在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

权利要求：1.一种分离的蛋白质，其特征在于，其包括BLyS抗体的互补决定区（CDR:重链CDRl、重链⑶R2和重链⑶R3中的一种或多种，和或，BLyS抗体的轻链⑶Rl、轻链⑶R2和轻链⑶R3中的一种或多种，所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.l8、SEQIDNo.26、SEQIDNo.34、SEQIDNo.42、SEQIDN〇.50、SEQIDNo.58、SEQIDNo.66、SEQIDNo.74、SEQIDNo.82、SEQIDNo.90或SEQIDNo.98所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3、SEQIDNo.ll、SEQIDNo.l9、SEQIDΝο·27、SEQIDNo.35、SEQIDNo.43、SEQIDNo.51、SEQIDNo.59、SEQIDNo.67、SEQIDNo.75、SEQIDNo.83、SEQIDNo.91或SEQIDNo.99所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.l2、SEQIDN〇.20、SEQIDNo.28、SEQIDNo.36、SEQIDNo.44、SEQIDNo.52、SEQIDN〇.60、SEQIDNo.68、SEQIDNo.76、SEQIDNo.84、SEQIDNo.92或SEQIDNo.100所示;所述轻链⑶Rl的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.l4、SEQIDNo.22、SEQIDN〇.30、SEQIDNo.38、SEQIDNo.46、SEQIDNo.54、SEQIDNo.62、SEQIDNo.70、SEQIDNo.78、SEQIDNo.86、SEQIDNo.94或SEQIDNo.102所示;所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.l5、SEQIDNo.23、SEQIDNo.31、SEQIDNo.39、SEQIDNo.47、SEQIDNo.55、SEQIDNo.63、SEQIDNo.71、SEQIDNo.79、SEQIDNo.87、SEQIDNo.95或SEQIDNo.103所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.l6、SEQIDNo.24、SEQIDNo.32、SEQIDN〇.40、SEQIDNo.48、SEQIDNo.56、SEQIDNo.64、SEQIDNo.72、SEQIDN〇.80、SEQIDNo.88、SEQIDNo.96或SEQIDNo.104所示；或者，所述重链⑶Rl的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.l8、SEQIDNo.26、SEQIDNo.34、SEQIDNo.42、SEQIDN〇.50、SEQIDNo.58、SEQIDNo.66、SEQIDNo.74、SEQIDNo.82、SEQIDNo.90或SEQIDNo.98所示的氨基酸序列至少有80%的序列同源性的氨基酸序列所示;所述重链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.3、SEQIDNo.ll、SEQIDNo.l9、SEQIDNo.27、SEQIDNo.35、SEQIDNo.43、SEQIDNo.51、SEQIDNo.59、SEQIDNo.67、SEQIDNo.75、SEQIDNo.83、SEQIDNo.91或SEQIDNo.99所示的氨基酸序列至少有80%的序列同源性的氨基酸序列所示;所述重链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.l2、SEQIDN〇.20、SEQIDNo.28、SEQIDNo.36、SEQIDNo.44、SEQIDNo.52、SEQIDN〇.60、SEQIDNo.68、SEQIDNo.76、SEQIDNo.84、SEQIDNo.92或SEQIDNo.100所示的氨基酸序列至少有80%的序列同源性的氨基酸序列所示;所述轻链⑶Rl的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.l4、SEQIDNo.22、SEQIDN〇.30、SEQIDNo.38、SEQIDNo.46、SEQIDNo.54、SEQIDNo.62、SEQIDNo.70、SEQIDNo.78、SEQIDNo.86、SEQIDNo.94或SEQIDNo.102所示的氨基酸序列至少有80%的序列同源性的氨基酸序列所示;所述轻链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.l5、SEQIDNo.23、SEQIDNo.31、SEQIDNo.39、SEQIDNo.47、SEQIDNo.55、SEQIDNo.63、SEQIDNo.71、SEQIDNo.79、SEQIDNo.87、SEQIDNo.95或SEQIDNo.103所示的氨基酸序列至少有80%的序列同源性的氨基酸序列所示;所述轻链⑶R3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.l6、SEQIDNo.24、SEQIDNo.32、SEQIDN〇.40、SEQIDNo.48、SEQIDNo.56、SEQIDNo.64、SEQIDNo.72、SEQIDNo.80、SEQIDNo.88、SEQIDNo.96或SEQIDNo.104所示的氨基酸序列至少有80%的序列同源性的氨基酸序列所示。2.如权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，所述重链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.2所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.4所示；所述重链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.10所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.11所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.12所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.18所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.19所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.20所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.26所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.27所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.28所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.34所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.35所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.36所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.42所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.43所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.44所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.50所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.51所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.52所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.58所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.59所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.60所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.66所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.67所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.68所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.74所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.75所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.76所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.82所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.83所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.84所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.90所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.91所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.92所示;所述重链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.98所示，所述重链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.99所示，且所述重链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.100所示；所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.6所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.7所示，且所述轻链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.8所示;所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.14所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.15所示，且所述轻链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.16所示;所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.22所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.23所示，且所述轻链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.24所示;所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.30所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.31所示，且所述轻链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.32所示;所述轻链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.38所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.39所示，且所述轻链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.40所示;所述轻链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.46所示，所述轻链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.47所示，且所述轻链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.48所示;所述轻链⑶Rl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.54所示，所述轻链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.55所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.56所示;所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.62所示，所述轻链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.63所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.64所示;所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.70所示，所述轻链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.71所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.72所示;所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.78所示，所述轻链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.79所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.80所示;所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.86所示，所述轻链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.87所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.88所示;所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.94所示，所述轻链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.95所示，且所述轻链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.96所示;或者，所述轻链CDRl的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.102所示，所述轻链⑶R2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.103所示，且所述轻链⑶R3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.104所示。3.如权利要求1或2所述的蛋白质，其特征在于，其还包括BLyS抗体的构架区，所述构架区包括重链构架区和或轻链构架区；较佳地，所述重链构架区为人或鼠抗体重链构架区，和或，所述轻链构架区为人或鼠抗体轻链构架区；更佳地，所述重链构架区为人抗体重链构架区，优选为人种系抗体重链Vh外显子的VhI-I8、Vh外显子的Vh3_7或者Jh外显子的Jh_6，且所述轻链构架区为人抗体轻链构架区，优选为人种系抗体轻链Vk外显子的B3、JK外显子的Jk-4或者Vk外显子的A10。4.如权利要求3所述的蛋白质，其特征在于，其包括所述CDR和构架区组成的BLyS抗体的重链可变区和或BLyS抗体的轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.l、SEQIDNo.9、SEQIDNo.l7、SEQIDNo.25、SEQIDNo.33、SEQIDNo.41、SEQIDNo.49、SEQIDNo.57、SEQIDNo.65、SEQIDNo.73、SEQIDNo.81、SEQIDNo.89、SEQIDNo.97、SEQIDN0.140、SEQIDN0.141、SEQIDN0.142、SEQIDN0.143、SEQIDN0.144、SEQIDN0.145、SEQIDN0.146、SEQIDN0.149、SEQIDN0.150、SEQIDN0.151或SEQIDNO.152所示;所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.5、SEQIDNo.l3、SEQIDNo.21、SEQIDNo.29、SEQIDNo.37、SEQIDNo.45、SEQIDNo.53、SEQIDNo.61、SEQIDNo.69、SEQIDNo.77、SEQIDNo.85、SEQIDNo.93、SEQIDN〇.101、SEQIDNo.l47、SEQIDNo.l48、SEQIDNo.l53、SEQIDNo.l54、SEQIDNo.l55、SEQIDNo.156、或SEQIDNo.157所示。5.如权利要求4所述的蛋白质，其特征在于，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.1所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.5所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.9所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.13所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.17所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.21所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.25所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.29所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.33所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.37所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.41所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.45所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.49所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.53所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.57所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.61所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.65所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.69所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.73所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.77所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.81所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.85所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.89所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.93所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.97所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.101所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.140所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.147所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.140所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.148所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.141所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.147所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.141所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.148所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.142所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.147所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.142所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.148所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.143所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.147所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.143所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.148所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.144所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.147所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.144所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.148所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.145所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.147所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.145所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.148所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.146所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.147所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.146所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.148所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.149所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.153所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.149所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.154所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.150所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.153所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.150所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.154所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.151所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.153所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.151所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.154所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.151所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.155所示；所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.151所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.156所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.151示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.157所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.152所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.155所示;所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.152所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.156所示;或者所述重链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.152所示，且所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.157所示。6.如权利要求1〜5中任一项所述的蛋白质，其特征在于，所述的蛋白质还包括抗体重链恒定区和或抗体轻链恒定区。7.如权利要求6所述的蛋白质，其特征在于，所述的抗体重链恒定区为人源或小鼠源抗体重链恒定区;所述的抗体轻链恒定区为人源或小鼠源抗体轻链恒定区。8.如权利要求7所述的蛋白质，其特征在于，所述的抗体重链恒定区为人源抗体重链恒定区;所述的抗体轻链恒定区为人源抗体轻链恒定区。9.如权利要求1〜5任一项所述的蛋白质，其特征在于，所述的蛋白质是BLyS抗体的单克隆抗体、抗体全长蛋白、抗原抗体结合域蛋白质片段、双特异性抗体、多特异性抗体、单链抗体、单域抗体或单区抗体。10.—种核酸，其特征在于，其编码如权利要求1〜9中任一项所述的蛋白质。11.如权利要求10所述的核酸，其特征在于，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDN〇.105、SEQIDN〇.107、SEQIDN〇.109、SEQIDNo.lll、SEQIDNo.ll3、SEQIDNo.ll5、SEQIDNo.ll7、SEQIDNo.ll9、SEQIDNo.l21、SEQIDΝο·123、SEQIDNo.l25、SEQIDNo.l27、SEQIDNo.l29、SEQIDN0.158、SEQIDN0.159、SEQIDN0.160、SEQIDN0.161、SEQIDN0.162、SEQIDN0.163、SEQIDN0.164、SEQIDN0.167、SEQIDNO.168、SEQIDNO.169或SEQIDNO.170所示；和或，编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDN〇.106、SEQIDN〇.108、SEQIDN〇.110、SEQIDNo.112、SEQIDNo.ll4、SEQIDNo.ll6、SEQIDNo.ll8、SEQIDN〇.120、SEQIDNo.l22、SEQIDNo.l24、SEQIDNo.l26、SEQIDNo.l28、SEQIDN〇.130、SEQIDNo.l65、SEQIDNo.166、SEQIDNo.l71、SEQIDNo.l72、SEQIDNo.l73、SEQIDNo.l74SSEQIDNo.l75m*。12.如权利要求11所述的核酸，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.105所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.106所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.107所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.108所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.109所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.110所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.111所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.112所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.113所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.114所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.115所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.116所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.117所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.118所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.119所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.120所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.121所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.122所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.123所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.124所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.125所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.126所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.127所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.128所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.129所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.130所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.158所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.165所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.158所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.166所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.159所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.165所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.159所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.166所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.160所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.165所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.160所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.166所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.161所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.165所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.161所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.166所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.162所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.165所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.162所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.166所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.163所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.165所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.163所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.166所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.164所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.165所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.164所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.166所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.167所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.171所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.167所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.172所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.168所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.171所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.168所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.172所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.169所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.171所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.169所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.172所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.169所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.173所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.169所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.174所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.169所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.175所示；编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.170所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.173所示;编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.170所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.174所示;或者，编码所述重链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.170所示，且编码所述轻链可变区的核酸的核苷酸序列如序列表SEQIDNo.175所示。13.—种包含如权利要求10〜12中任一项所述的核酸的重组表达载体。14.一种包含如权利要求13所述的重组表达载体的重组表达转化体。15.—种BLyS抗体的制备方法，其包括如下步骤:培养如权利要求14所述的重组表达转化体，从培养物中获得BLyS抗体。16.—种检测过表达BLyS蛋白的细胞的方法，其特征在于，包括如下的步骤：如权利要求1〜9中任一项所述的蛋白质与待检样品在体外接触，检测如权利要求1〜9中任一项所述的蛋白质与所述待检样品的结合即可。17.—种检测过表达BLyS蛋白的细胞的组合物，其特征在于，其包括如权利要求1〜9中任一项所述的蛋白质作为活性成分。18.—种药物组合物，其特征在于，其包括如权利要求1〜9中任一项所述的蛋白质作为活性成分和药学可接受的载体。19.如权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括0.01〜99.99%的如权利要求1〜9中任一项所述的蛋白质和0.01〜99.99%的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。20.—种如权利要求1〜9中任一项所述的蛋白质或者如权利要求18或19所述的药物组合物在制备预防或治疗与BLyS表达或功能异常相关的疾病的药物中的应用;较佳地，所述的与BLyS表达或功能异常相关的疾病为自体免疫疾病、炎症性疾病、感染性疾病或增殖性疾病。

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