申请/专利权人：徐州医科大学

申请日：2020-04-29

公开（公告）日：2023-01-31

公开（公告）号：CN111518833B

主分类号：C12N15/861

分类号：C12N15/861;C12N15/66;A61K35/761;A61P35/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.01.31#授权;2020.09.04#实质审查的生效;2020.08.11#公开

摘要：本发明涉及一种携带AIM2基因的溶瘤腺病毒的构建方法，属于生物医学技术领域。首先通过PCR反应和克隆技术，构建CAIX启动子载体pZD55‑CAIX，接着构建腺病毒穿梭质粒pZD55‑CAIX‑AIM2，最后将通过鉴定的质粒pZD55‑CAIX‑AIM2与腺病毒骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞，待细胞出现病毒噬斑后，得到目的溶瘤腺病毒Ad‑CAIX‑AIM2。该溶瘤腺病毒能特异地到达肿瘤细胞部位，高效、特异性杀伤肿瘤细胞，而不影响正常细胞，并且在肿瘤组织中的复制能力强。

主权项：1.一种携带AIM2基因的溶瘤腺病毒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）CAIX启动子载体pZD55-CAIX的构建通过PCR反应和克隆技术，从质粒pGL3-CAIX中获取218bp的CAIX核心启动子片段，然后插入到腺病毒质粒pZD55中，得到pZD55-CAIX；（2）腺病毒穿梭质粒pZD55-CAIX-AIM2的构建以pEF-BOS-AIM2为模板，PCR扩增获得不含终止子1029bp的AIM2序列，将其克隆至增殖缺陷腺病毒载体pCA13的HindIII、XbaI位点，获得pCA13-AIM2质粒；从pCA13-AIM2质粒中获取CMV+AIM2+PolyA表达框，将其插入pZD55-CAIX，得到重组腺病毒穿梭质粒pZD55-CAIX-AIM2；（3）目的溶瘤腺病毒的制备将通过鉴定的质粒pZD55-CAIX-AIM2与腺病毒骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞，待细胞出现病毒噬斑后，得到目的溶瘤腺病毒Ad-CAIX-AIM2，所述腺病毒穿梭质粒pZD55-CAIX-AIM2的序列如SEQIDNO.:6所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 徐州医科大学 一种携带AIM2基因的溶瘤腺病毒的构建方法及应用

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