申请/专利权人：暨南大学附属第一医院(广州华侨医院)

申请日：2022-11-11

公开（公告）日：2023-03-21

公开（公告）号：CN115820838A

主分类号：C12Q1/6883

分类号：C12Q1/6883;C12N15/11;C12Q1/70;C12Q1/06;G01N33/569;G01N33/548;G01N33/58;C12R1/92

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.04.07#实质审查的生效;2023.03.21#公开

摘要：本发明涉及分子医学技术领域，尤其涉及IPCC12Q1，更具体地，涉及缺血性脑卒中SEREX标志物的应用。本发明通过免疫筛选重组cDNA表达克隆筛选出PABPC1，然后通过生物信息技术进一步验证了PABPC1在缺血性脑卒中TIA和CI中的重要性，通过PABPC1在试剂盒中的相关应用，测定TIA和CI的疾病进程中PABPC1的含量，可以促进心脑血管相关疾病的预防与治疗。

主权项：1.缺血性脑卒中SEREX标志物的应用，其特征在于，所述标志物的筛选方法，包括以下步骤：S1：提取XL1-Blue菌株加入8～12mLLB培养基中，在恒温箱中培养备用。取人主动脉内皮细胞λZAPII噬菌体cDNA表达文库稀释液8～12μL与500～700μLXL1-Blue37℃混合孵育12～18min；加入7～8mLNZYTopAgar混匀平铺在35～40℃预热的NZY琼脂平板上，凝固后35～40℃倒置培养4～6h，培养至噬菌斑形成；S2：将噬菌斑转印硝酸纤维素膜，经IPTG诱导cDNA蛋白表达后，与一次抗体共育，再用二次抗体孵育，最后通过显色反应观察一次抗体与膜上cDNA克隆表达蛋白是否发生血清学反应，挑取阳性克隆，并降低噬菌体滴度，再次扩增进行第二、三轮筛库以纯化得到抗原单克隆；S3：配置阳性重组cDNAλZAPII噬菌体和辅助噬菌体的混合液，加热孵育裂解λZAPII噬菌体和XL1-Blue，离心收集噬菌体，转染菌株，铺平板37℃倒置过夜；经卡那霉素筛选获得转化的阳性克隆pBluescript质粒；挑取单个菌落扩增、保种及小量质粒提取；S4：经双酶切鉴定后对搭载cDNA片段的pBluescript质粒进行DNA测序；S5：利用美国国家生物技术信息中心互联网公开的生物信息学资源：参考序列数据库RefSeqDatabase，使用NCBI-BLAST检索工具，将测得的DNA序列与已知基因序列进行同源性检索与分析，获得目的基因序列的生物学信息；所述标志物为目的基因；所述目的基因包括PABPC1；所述标志物为非疾病诊断用途。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 暨南大学附属第一医院(广州华侨医院) 缺血性脑卒中SEREX标志物的应用

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