申请/专利权人：中南大学湘雅医院

申请日：2022-12-09

公开（公告）日：2023-05-05

公开（公告）号：CN116064667A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/89;A01K67/027;C12N15/57;A61K49/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.05.23#实质审查的生效;2023.05.05#公开

摘要：本发明公开了一种基于CRISPRCas9的人源化ATXN3基因敲入小鼠模型的构建方法及应用。本发明通过gRNA和Cas9核酸酶直接对小鼠受精卵进行定点基因编辑，引导更高效率的同源重组，在小鼠Atxn3基因1号外显子处定点敲入了合成的ATXN3‑96Q‑CDS序列含96次CAG三核苷酸重复的人源ATXN3基因CDS序列，构建了一种致病基因完全人源化的SCA3小鼠模型，并从分子水平、行为学、神经病理和神经影像等方面对该模型进行了表型验证。相较于既往模型，本发明的小鼠模型能更好模拟SCA3患者的遗传背景和发病过程，将为后续发病机制及治疗研究提供有效工具。

主权项：1.一种基于CRISPRCas9的人源化ATXN3基因敲入小鼠模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：目的基因序列及重组质粒的合成：构建含96次CAG三核苷酸重复的目的ATXN3-96Q-CDS序列，ATXN3-96Q-CDS序列如SEQIDNO.1所示；将合成的目的基因序列导入质粒载体，构建重组质粒，将验证正确的重组质粒作为donor载体；设计5’端和3’端的两条gRNA序列：5’端gRNA序列如SEQIDNO.2所示，3’端gRNA序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示；Cas9gRNAdonor的显微注射：将Cas9、gRNA以及含有目的基因序列的donor载体显微注射到小鼠受精卵中，再将受精卵移植到假孕母鼠，构建得到F0代首建鼠。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中南大学湘雅医院 基于CRISPR/Cas9的人源化ATXN3基因敲入小鼠模型的构建方法及应用

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