申请/专利权人：中国农业科学院作物科学研究所

申请日：2022-02-28

公开（公告）日：2023-05-16

公开（公告）号：CN114591977B

主分类号：C12N15/54

分类号：C12N15/54;C12N9/10;C07K19/00;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.05.16#授权;2022.06.24#实质审查的生效;2022.06.07#公开

摘要：本发明公开了通过精准编辑内源EPSPS基因获得抗草甘膦水稻的方法及其所用系统。本研究以OsEPSPS为靶标基因，通过自剪切多肽T2A将RAD52和引导编辑器融合表达，构建新型的引导编辑系统，利用RAD52可以促进基因组DNA与同源的ssRNA之间链交换的方法，来提高引导编辑系统的编辑效率，为农作物精准设计分子育种提供了新技术和新方法。另外，草甘膦是世界上应用最多的除草剂，对人畜与环境危害极小。本研究获得的高抗草甘膦除草剂的水稻编辑植株为培育新型高抗草甘膦除草剂的水稻新种质提供了新材料，有望大大提高水稻生产的经济性，也为获得其它新型高抗草甘膦除草剂的作物新种质提供了参考。

主权项：1.产生抗草甘膦水稻的方法，其特征在于：所述方法包括将靶向水稻基因组中5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶基因的引导编辑系统表达载体导入待编辑水稻，得到抗草甘膦水稻；引导编辑系统表达载体包括融合蛋白的编码基因、pegRNA的编码基因和介导非靶向DNA单链切刻nick的sgRNA的编码基因，所述融合蛋白是由核定位信号1-N、nCas9、M-MLV-RT、核定位信号1-C、自剪切多肽、核定位信号2-N、RAD52和核定位信号2-C连接而成的蛋白质；所述pegRNA包括介导靶向DNA单链切刻nick的sgRNA、引物结合位点和储存有靶向位点编辑信息的反转录模板，所述靶向位点为所述水稻基因组中EPSPS基因；所述RAD52为如下B1）或B2）：B1）、序列表中序列1第19733-21007位核苷酸编码的蛋白质；B2）、在B1）所示的蛋白质的羧基端或和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白；所述nCas9为如下B11）或B12）：B11）、序列表中序列1第13313-17413位核苷酸编码的蛋白质；B12）、在B11）所示的蛋白质的羧基端或和氨基端融合蛋白标签得到的融合蛋白。

全文数据：

权利要求：

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