申请/专利权人：内蒙古大学

申请日：2022-08-03

公开（公告）日：2023-05-23

公开（公告）号：CN116144652A

主分类号：C12N15/113

分类号：C12N15/113;C12N15/85;C12N15/65;C12N15/55;C12N15/90;C12N5/10;A01K67/027

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.06.13#实质审查的生效;2023.05.23#公开

摘要：本发明提供了特异性靶向绒山羊安全位点H11的sgRNA和利用CRISPRCas9系统介导完成定点敲除以及定点整合EGFP基因的应用。本发明首先利用生物信息学方法预测出H11位点的完整序列SEQIDNO.1，然后针对H11位点设计了两个sgRNASEQIDNO.2和3，转录所述sgRNA序列的DNA序列如SEQIDNO.4或5所示。构建了基于CRISPRCas9系统的打靶载体，然后利用TA克隆测序对sgRNA的引导效率进行验证，同时构建了同源整合EGFP基因载体，最后利用筛选出的sgRNACas9gRNA共表达载体和同源整合载体H11‑EGFP同时转染进绒山羊胎儿成纤维细胞，获得了H11位点定点整合EGFP基因的细胞株。本发明的sgRNA能特异识别绒山羊的H11位点，引导Cas9核酸内切酶对该位点进行高效切割，打靶效率在50％以上，能有效减少CRISPRCas9系统存在的脱靶现象，进而减少因非特异性切割造成的非目标基因序列的突变。通过构建Cas9gRNA表达载体可以在细胞、胚胎甚至是个体水平实现H11位点的特异性修饰敲除或敲入，从而研究特定基因的表达情况，为新品种山羊的培育提供技术支持。

主权项：1.特异靶向绒山羊安全位点H11的sgRNA，其RNA序列如SEQIDNO.2或SEQIDNO.3。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 内蒙古大学 特异性靶向绒山羊安全位点H11的sgRNA及其应用

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