申请/专利权人:大连大学
申请日:2020-08-24
公开(公告)日:2023-05-23
公开(公告)号:CN111979243B
主分类号:C12N15/113
分类号:C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10;C12N9/22
优先权:
专利状态码:有效-授权
法律状态:2023.05.23#授权;2020.12.11#实质审查的生效;2020.11.24#公开
摘要:本发明涉及利用CRISPRCas9系统构建TAP基因缺失的猪T2细胞的方法,属于动物基因工程和遗传修饰技术领域。技术方案主要包括:首先进行TAP2基因敲除,把识别TAP2的sgRNA连接到pUC57‑sgRNA载体上,转化感受态细胞,获得含有靶向识别序列的pUC57‑sgRNA质粒,通过测序筛选阳性克隆。将重组质粒pUC57‑sgRNA和Cas9质粒共转染PK15细胞。在TAP2基因敲除的细胞上利用同样的方法敲除TAP1。本发明利用CRISPRCas9构建TAP基因敲除的PK15细胞系,为筛选多种猪源病毒CTL表位建立细胞模型,同时为外源性抗原的TAP非依赖性递呈机制的研究建立了细胞模型。
主权项:1.一种敲除猪TAP2基因的sgRNA,其特征在于,包括TAP2-sgRNA-1,所述的TAP2-sgRNA-1的序列如下:TAP2-sgRNA-1olige1:5′-caccGGAGGGCATCTTGCGACT-3′;TAP2-sgRNA-1olige2:5′-aaacAGTCGCAAGATGCCCTCC-3′;二者退火形成双链。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 大连大学 利用CRISPR/Cas9系统构建TAP基因缺失的猪T2细胞的方法
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