申请/专利权人：深圳市前海蛇口自贸区医院(深圳市南山区蛇口人民医院)

申请日：2022-11-25

公开（公告）日：2023-07-11

公开（公告）号：CN116406646A

主分类号：A01K67/027

分类号：A01K67/027

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.07.28#实质审查的生效;2023.07.11#公开

摘要：本发明公开了感染后咳嗽肺热阴虚证幼年大鼠模型的构建及验证，包括以下步骤：S1、动物分组及造模；S2、给药；S3、观察指标；S3.1、体质量测定；S3.2、粪便含水量测定；S3.3、体温测定；S3.4、饮水量计算；S3.5、咳嗽敏感性检测；S3.6、肺功能测定；S3.7、肺泡灌洗液BALF中细胞分类计数及炎性因子测定；S3.8、血清cAMP、cGMP含量测定；S3.9、肺组织病理；S4、结果比较；S5、验证结果；烟熏为目前构建肺阴虚证动物模型重要的干预因素，LPS又为诱导气道炎症构建肺热咳嗽动物模型的关键因素，因此联合烟熏+LPS滴鼻+辣椒素雾化构建的PIC幼年大鼠模型可能具备肺热阴虚证候特征。本研究拟从造模因素、症状评价、客观指标评价、以方测证4个方面，对该模型的中医证候属性进行判定。

主权项：1.感染后咳嗽肺热阴虚证幼年大鼠模型的构建及验证，其特征在于：包括以下步骤：S1、动物分组及造模：选取若干只幼年SD大鼠适应性喂养1周后，采用随机数字表法选取10只作为空白组，剩余大鼠采用烟熏+LPS滴鼻+辣椒素雾化制备PIC模型，将造模成功大鼠采用随机数字表法分成模型组、泻白增液汤组、橘红痰咳液组，每组10只，实验第1～18天为造模阶段，实验第19～26天为以方测证阶段；S2、给药：从实验第19天开始为以方测证阶段，泻白增液汤方证对应组给予浓度为1.48gml的泻白增液汤水煎液10mlkg灌胃，橘红痰咳液方证非对应组给予橘红痰咳液5mlkg灌胃，空白组、模型组大鼠给予生理盐水10mlkg灌胃。各组灌胃均每日1次，持续7天；S3、观察指标：S3.1、体质量测定：分别于实验第1、10、19天测量空白组、模型组大鼠体质量，实验第26天，按上述方法测量4组大鼠体质量，评价“形体消瘦”程度；S3.2、粪便含水量测定：分别于实验第1、10、19天测量空白组、模型组大鼠粪便含水量，提起大鼠尾部，轻轻按摩其肛门部，促使其排便，取刚排出的新鲜粪便30mg烘干70℃，4h后再次称重，计算烘干前后大便重量差与烘干前大便重量比值。实验第26天，按上述方法测量4组大鼠粪便含水量，评价“便干”程度；S3.3、体温测定：分别于实验第1、10、19天20:00使用红外测温仪检测空白组、模型组大鼠肛温、四肢爪心及心前区温度，将测温探头对准检测部位正中，距离1-2cm。实验第26天，按上述方法测量4组大鼠体温，评价大鼠“阴虚内热”的程度；S3.4、饮水量计算：分别于实验第1、10、19天，将空白组、模型组共20只大鼠于5个鼠笼分装；将鼠笼用十字形隔板隔成4个相对独立空间，分别装入1只大鼠，每只大鼠给予一个饮水瓶，即一个鼠笼4只大鼠、4个饮水瓶，统计每只大鼠的饮水量，饮水量＝给予每只大鼠的水量-24h后剩余水量；实验第26天，按照上述方法将4组40只大鼠分成10个笼子，统计每只大鼠饮水量，评价大鼠“口干多饮”的程度；S3.5、咳嗽敏感性检测：于实验第27天取1×10-4molL的辣椒素溶液作为诱咳液加入多功能雾化给药仪中，对大鼠进行雾化并开始计时，雾化3min，结束后观察2min，记录各组大鼠咳嗽潜伏期、雾化期间及雾化结束后共5min的咳嗽次数；S3.6、肺功能测定：于实验第27天咳嗽敏感性检测后采用10％水合氯醛3mlkg腹腔注射麻醉大鼠，沿颈部正中做一纵行切口，找到气管，在气管上做一长约1mm的切口，插入导管，将大鼠卧位置于小动物呼吸机的密闭体积描记箱中，检测呼气时间TE、增强呼气间歇PENH、呼气末暂停时间EEP、松弛时间RT4个指标；S3.7、肺泡灌洗液BALF中细胞分类计数及炎性因子测定：上述步骤完成后，结扎右主支气管，经气管插管取生理盐水1ml灌洗左肺，共3次，回收BALF离心，4℃、3000rmin离心半径5cm离心10min，取上清液，采用ELISA检测试剂盒测定TNF-α和IL-1β水平。BALF离心后沉渣经生理盐水重悬，吸取细胞悬液采用Diff-Quik染色液染色细胞涂片，作细胞分类计数；S3.8、血清cAMP、cGMP含量测定：大鼠腹主动脉采血低温离心，4℃、5000rmi，离心半径5cm，离心25min，取上清液，-20℃冻存，采用ELISA法测定血清cAMP、cGMP含量，操作及方法按试剂盒说明书进行；S3.9、肺组织病理：取出大鼠右肺组织放入4％多聚甲醛固定，石蜡包埋、切片，HE染色，在显微镜下观察各组大鼠支气管及肺组织病变和炎症细胞浸润情况；S4、结果比较：S4.1、造模期空白组和模型组大鼠体质量、粪便含水量、肛温、饮水量比较；S4.2、造模期天空白组和模型组大鼠不同时间四肢爪心及心前区温度比较；S4.3、各组大鼠实验期间行为学变化比较；S4.4、实验第26天各组大鼠体质量、粪便含水量、肛温、饮水量比较；S4.5、实验第26天各组大鼠四肢爪心及心前区温度比较；S4.6、各组大鼠咳嗽敏感性和肺功能指标比较；S4.7、各组大鼠BALF分类细胞计数及IL-1β、TNF-α水平比较；S4.8、各组大鼠血清cAMP、cGMP含量比较；S4.9、各组大鼠肺组织病理变化；S5、验证结果：联合烟熏、脂多糖滴鼻、辣椒素雾化诱咳所构建PIC幼年大鼠模型，基本具备PIC肺热阴虚证的证候特点，且未施加“证”因素的模型，因干预因素少而更稳定可靠，为中医药防治小儿PIC的动物实验研究提供病证结合模型的应用依据。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 深圳市前海蛇口自贸区医院(深圳市南山区蛇口人民医院) 感染后咳嗽肺热阴虚证幼年大鼠模型的构建及验证

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD