申请/专利权人：陕西中医药大学

申请日：2022-02-25

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN114657214B

主分类号：C12N15/873

分类号：C12N15/873;A01K67/0276;C12N15/61

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2022.07.12#实质审查的生效;2022.06.24#公开

摘要：本发明属于生物工程技术领域，涉及一种自发性肾阴虚Ptgds基因敲除大鼠模型的构建方法，包括以下步骤：1设计靶序列Ptgds‑sgRNA12；2纯化Cas9mRNA、Ptgds‑sgRNA12；3利用CRISPRCas9系统，将Ptgds基因内的序列片段进行靶向敲除；4将纯化的Cas9mRNA、Ptgds‑sgRNA12和Ptgds敲除基因注射到大鼠胚胎得到新生大鼠；5鉴定选择出杂合子大鼠；6进一步与野生大鼠进行多代繁殖得到Ptgds基因敲除大鼠模型。本发明具有基因修饰精确性高，靶向性特异、实验周期短的优点，开发出可靠且稳定的基因工程模型，为更年期综合征相关疾病的治疗作用奠定基础。

主权项：1.一种自发性肾阴虚Ptgds基因敲除大鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1在Ptgds基因位点设计两个靶序列，分别为Ptgds-sgRNA1和Ptgds-sgRNA2；2通过体外转录获得纯化Cas9mRNA、Ptgds-sgRNA1和Ptgds-sgRNA2；3利用CRISPRCas9系统，将Ptgds基因内长度为2944bp的序列片段进行靶向敲除，得到Ptgds敲除后基因；4将纯化好的Cas9mRNA、Ptgds-sgRNA1、Ptgds-sgRNA2和Ptgds敲除后基因共同注射到大鼠胚胎中，注射后将胚胎移植到代孕受体大鼠的输卵管内，得到新生大鼠；5对新生大鼠进行基因鉴定选择出杂合子大鼠；6杂合子大鼠与野生大鼠进行多代繁殖，对每代得到的子鼠进行基因鉴定直至基因鉴出纯合子大鼠，即Ptgds基因敲除大鼠模型。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 陕西中医药大学 一种自发性肾阴虚Ptgds基因敲除大鼠模型的构建方法

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