申请/专利权人：中国医学科学院肿瘤医院

申请日：2022-09-30

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN117821467A

主分类号：C12N15/12

分类号：C12N15/12;C12N15/85;C12N15/90;C12N15/113;A01K67/0278

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.23#实质审查的生效;2024.04.05#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，提供了一种Mfsd2a基因特异性敲入小鼠肝组织模型的构建方法，包括以下步骤：通过无缝克隆技术构建打靶基因；将打靶基因连接到PMD‑18T载体上，得到供体质粒；将Cas9mRNA、gRNA和供体质粒转入到野生型小鼠受精卵中，得到同源重组阳性F0代小鼠，与野生型小鼠回交后得到loxp小鼠；将在肝脏中特异性表达重组酶Cre的小鼠与loxp小鼠配繁，得到Mfsd2a过表达小鼠模型。通过本发明提供的构建方法可以得到Mfsd2a基因在小鼠肝脏中的过表达模型，能够很好的推进Mfsd2a基因在肝细胞肝癌中的研究，为肝细胞肝癌患者寻找到新的靶点药物提供帮助。

主权项：1.一种Mfsd2a基因特异性敲入小鼠肝组织模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1通过无缝克隆技术构建打靶基因，所述打靶基因包括5'同源臂、CAG启动子、loxP-Stop-loxP、Mfsd2a-flag-IRES-EGFP-WPRE-PolyA和3'同源臂；2根据步骤1所述的打靶基因设计特异性引物，利用特异性引物将打靶基因连接到PMD-18T载体上，得到供体质粒；3将Cas9mRNA、gRNA和步骤2所述的供体质粒转入到野生型小鼠的受精卵中，得到F0代小鼠，并鉴定出同源重组阳性F0代小鼠，同源重组阳性F0代小鼠与野生型小鼠回交后得到F1代小鼠，筛选得到稳定遗传的Mfsd2a-loxP+-小鼠；4将在肝脏中特异性表达重组酶Cre的小鼠与步骤3中的Mfsd2a-loxP+-小鼠配繁，筛选出Mfsd2a-loxP+-与Cre+-双阳性的小鼠，即为Mfsd2a过表达小鼠模型。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国医学科学院肿瘤医院 一种Mfsd2a基因特异性敲入小鼠肝组织模型的构建方法

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