申请/专利权人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所

申请日：2023-04-24

公开（公告）日：2023-08-01

公开（公告）号：CN116515928A

主分类号：C12P19/36

分类号：C12P19/36;C12P19/32;C12N9/12;C12N15/54;C12N15/70;C07H19/213;C07H1/06

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.08.18#实质审查的生效;2023.08.01#公开

摘要：本发明提供了一种第二信使小分子2’,3’‑cGAMP的制备与纯化方法。本发明首先重组构建了鼠mcGAS蛋白，在引入双链DNA的条件下，催化合成2',3'‑cGAMP小分子，用高效液相色谱的方法纯化获得高纯度的2',3'‑cGAMP小分子，随后通过汽相扩散坐滴的结晶办法结晶，显微镜下捞取晶体，有效去除经液相纯化后产品中含有的液相流动相的盐乙酸铵。本发明通过引入双链DNA的方式进行催化合成提高了催化合成率。

主权项：1.一种第二信使小分子2’,3’-cGAMP的制备与纯化方法，其特征是，包括以下步骤：1重组构建鼠mcGAS蛋白采用PCR技术，以鼠cGAS基因为模板扩增得到具有功能活性的cGAS基因序列，然后将mcGAS基因部分序列与pET-22b质粒进行重组，再转入大肠杆菌感受态细胞中获得PET22b-mcGAS菌种；菌种经扩大培养诱导表达、菌体破碎、纯化后获得高纯度的mcGAS蛋白；2在引入双链DNA的条件下，催化合成2',3'-cGAMP小分子将步骤1纯化后的mcGAS蛋白加入到含有dsDNA、GTP和ATP的反应体系中，在引入双链DNA的条件下催化合成2',3'-cGAMP小分子；反应完成后将体系煮沸至mcGAS蛋白变性失活，然后离心收集滤液；3采用半制备高效反相HPLC纯化2’,3’-cGAMP以AgelaVenusilMPC18为色谱柱进行纯化，收集纯化的小分子；4结晶去除产物中的流动相盐以含有醋酸钠和硫酸铵的溶液为结晶溶液，采用汽相扩散坐滴的结晶办法获得2',3'-cGAMP的结晶，显微镜下捞取晶体，晾干后，获得了高纯度的2',3'cGAMP粉末。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 第二信使小分子2’,3’-cGAMP的制备与纯化方法

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