申请/专利权人：北京复昇生物科技有限公司

申请日：2021-07-16

公开（公告）日：2023-08-15

公开（公告）号：CN113528571B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/113;C12N15/90;C12N15/877;C12N9/22;C12N15/55;C12N5/10;A01K67/027

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.08.15#授权;2021.11.09#实质审查的生效;2021.10.22#公开

摘要：本发明公开了hACE2人源化转基因猪的构建方法及应用。采用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，用hACE2cDNA替换猪自身的ACE2基因，避免了人源ACE2表达的同时猪内源ACE2也表达，由此造成猪模型无法很好地再现人类疾病特征的问题。本发明构建的hACE2人源化猪模型是能够模拟人类COVID‑19临床症状和治疗反应的理想大动物猪模型，可用于SARS‑CoV‑2感染和发病机制的研究，特别适合于由SARS‑CoV‑2感染所致的多器官病症、重症、慢性疾病以及后遗症的研究，并可供诊断技术、抗病毒疗法和疫苗的开发与测试，候选药物疗效和安全性的评价，该模型有助于解决当前缺乏有效新冠肺炎动物模型的困境。

主权项：1.猪克隆胚胎的制备方法，其特征在于，以hACE2人源化转基因细胞系作为核移植供体细胞，离体的猪卵母细胞为核移植受体细胞，通过核移植技术获得猪克隆胚胎；所述hACE2人源化转基因细胞系是将靶向编辑猪血管紧张素转化酶ACE2基因的CRISPR-Cas9系统导入猪胎儿成纤维细胞系中，获得的中靶阳性细胞克隆，即为hACE2人源化转基因细胞系；所述靶向编辑猪血管紧张素转化酶ACE2基因的CRISPR-Cas9系统包括猪血管紧张素转化酶ACE2基因打靶载体和携带人血管紧张素转化酶ACE2基因的同源修复载体；所述打靶载体是基于CRISPR-Cas9技术设计的靶向猪血管紧张素转化酶ACE2基因的打靶载体，其包含靶向猪血管紧张素转化酶ACE2基因的sgRNA序列以及编码Cas9核酸酶的核酸序列；所述同源修复载体包含如下DonorDNA：SEQIDNO:1所示的血管紧张素转化酶ACE2基因的上游同源臂-人血管紧张素转化酶ACE2基因的cDNA序列-polyA序列-SEQIDNO:2所示的血管紧张素转化酶ACE2基因的下游同源臂；其中，猪血管紧张素转化酶ACE2基因在NCBI上的参考序列编号为100144303；人血管紧张素转化酶ACE2基因在NCBI上的参考序列编号为59272；sgRNA作用位点的DNA序列为5′-CCACTGAGGAACTGGCCAAGACA-3′；DonorDNA的序列如SEQIDNO:3所示。

全文数据：

权利要求：

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