申请/专利权人：东北林业大学

申请日：2023-04-27

公开（公告）日：2023-08-22

公开（公告）号：CN116622748A

主分类号：C12N15/55

分类号：C12N15/55;C12N15/113;C12N15/70;C12N15/87;C12N15/11;A01N57/16;A01P7/04;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.09.08#实质审查的生效;2023.08.22#公开

摘要：本发明公开了一种缀叶丛螟液泡ATP酶A亚基LmV‑ATPaseA基因、其dsRNA及其合成方法和抗虫性应用，通过转录组分析，设计并合成LmV‑ATPaseA基因开放阅读框的特异性引物对SEQIDNO：4和SEQIDNO:5，经过基因克隆获得LmV‑ATPaseA基因序列，核苷酸序列为SEQIDNO：1，氨基酸序列为SEQIDNO:2，然后选择序列为SEQIDNO：3的基因片段为RNAi靶序列，设计并合成带有酶切位点的引物对SEQIDNO.6和SEQIDNO.7，PCR扩增，构建原核表达载体并诱导dsRNA表达。通过对缀叶丛螟幼虫进行dsRNA的饲喂，干扰LmV‑ATPaseA基因的表达，缀叶丛螟幼虫出现进食障碍死亡等异常表型，靶标基因表达量显著降低，幼虫死亡率升高。本发明为林业缀叶丛螟的害虫防治提供高效性、特异性和安全性的广泛应用前景。

主权项：1.一种缀叶丛螟液泡ATP酶A亚基LmV-ATPaseA基因、其dsRNA及其合成方法和抗虫性应用，其特征在于：1LmV-ATPaseA基因来自于缀叶丛螟，通过引物设计、合成、PCR扩增、测序、序列分析等确定LmV-ATPaseA基因序列的准确性；2对LmV-ATPaseA基因RNAi干扰的靶标序列预测，设计并合成引物，PCR扩增，构建选定目的基因片段的L4440载体，转入宿主大肠杆菌HT115中获得HT115-L4440-LmV-ATPaseA菌液；3IPTG诱导确定LmV-ATPaseA基因的dsRNA的表达；4对缀叶丛螟幼虫进行LmV-ATPaseA基因的dsRNA的饲喂，可以使缀叶丛螟幼虫有明显的进食障碍等异常表现而死亡的现象。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东北林业大学 缀叶丛螟液泡ATP酶A亚基（LmV-ATPase A）基因、其dsRNA及其合成方法和抗虫性应用

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