申请/专利权人：河南仁华生物科技有限公司;上海医药工业研究院

申请日：2018-08-28

公开（公告）日：2024-04-23

公开（公告）号：CN110862427B

主分类号：C07H15/236

分类号：C07H15/236;C07H1/06

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.23#授权;2021.08.27#实质审查的生效;2020.03.06#公开

摘要：本发明公开了一种庆大霉素C1a的纯化方法。该方法包括如下步骤：1将庆大霉素发酵液依次经大孔吸附树脂层析、大孔弱酸性阳离子树脂层析，得层析液；或者，将庆大霉素发酵液依次经大孔弱酸性阳离子树脂层析、大孔吸附树脂层析，得层析液；2将步骤1中所述层析液的pH调至10.0‑12.0，经反相吸附树脂层析，得层析液C，将所述层析液C的pH调节至4.0‑8.0，即可；所述反相吸附树脂层析的流动相为pH1.0‑2.0的酸水溶液，所述反相吸附树脂为聚苯乙烯二乙烯基苯系树脂。本发明的纯化方法操作简单、生产成本低，在保证收率大于41％的前提下，分离得到的庆大霉素C1a纯度大于96％。

主权项：1.一种庆大霉素C1a的纯化方法，其特征在于，其包括下述步骤：（1）将pH调整为10.0-12.0的庆大霉素发酵液经大孔吸附树脂层析，经所述大孔吸附树脂层析前，经水和pH2-5的酸水溶液洗脱除杂，得层析液A1；将pH调整为6.0-8.0的层析液A1经大孔弱酸性阳离子树脂层析，经所述大孔弱酸性阳离子树脂层析前，经水和pH8-10的氨水溶液洗脱除杂，得层析液A2；所述大孔吸附树脂层析的流动相为pH1.0-2.0的酸水溶液，所述大孔弱酸性阳离子树脂层析的流动相为pH11.0-12.0的氨水溶液；或者，将pH调整为6.0-8.0的庆大霉素发酵液经大孔弱酸性阳离子树脂层析，经所述大孔弱酸性阳离子树脂层析前，经水和pH8-10的氨水溶液洗脱除杂，得层析液B1；将pH调整为10.0-12.0的层析液B1经大孔吸附树脂层析，经所述大孔吸附树脂层析前，经水和pH2-5的酸水溶液洗脱除杂，得层析液B2；所述大孔弱酸性阳离子树脂层析的流动相为pH11.0-12.0的氨水溶液，所述大孔吸附树脂层析的流动相为pH1.0-2.0的酸水溶液；（2）将步骤（1）中所述层析液A2或所述层析液B2的pH调至10.0-12.0，经反相吸附树脂层析，经所述反相吸附树脂层析前，经水和pH1.0-3.0的酸水溶液洗脱除杂，得层析液C，将所述层析液C的pH调至4.0-8.0，即可；所述反相吸附树脂层析的流动相为pH1.0-2.0的酸水溶液，所述反相吸附树脂为聚苯乙烯二乙烯基苯系树脂；步骤（1）中，所述庆大霉素发酵液为绛红小单胞菌（Micromonosporapurprua）KD1989经发酵后所得的发酵液；所述庆大霉素发酵液中，庆大霉素C1占23-35%、庆大霉素C1a占30-55%、庆大霉素C2和庆大霉素C2a质量之和占30-50%，百分比是指各组分的质量在庆大霉素发酵液主要有效成分质量之和中的占比；步骤（1）中，将所述庆大霉素发酵液经预处理再进行层析，所述预处理为将所述庆大霉素发酵液的pH调节至2后过滤；步骤（1）中，所述大孔吸附树脂的种类为DM11树脂、LX1500树脂、HZ-816树脂、HZ-803树脂、HZ-814树脂和HZ-804树脂中的一种或多种；步骤（1）中，所述大孔弱酸性阳离子树脂的种类为HZ-0156树脂、HZD-2树脂、D-152树脂、HD-2树脂和ZGD-115树脂中的一种或多种；步骤（2）中，所述反相吸附树脂的种类为NM100树脂、NM200树脂、ups40-300树脂、ups60-300树脂、PR30-300树脂和PR60-300树脂中的一种或多种；步骤（2）中，将所述层析液C经纯化处理，所述纯化处理包括下述步骤，将所述层析液C经浓缩、调节pH至4.0-8.0搅拌边滴加短链醇，得固体，即可。

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