申请/专利权人：石家庄埃佤基因科技有限公司

申请日：2019-09-16

公开（公告）日：2023-10-10

公开（公告）号：CN112481309B

主分类号：C12N15/90

分类号：C12N15/90;C12N9/22;C12N1/19;C12R1/865

优先权：["20190912 CN 2019108665398"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.10.10#授权;2021.03.30#实质审查的生效;2021.03.12#公开

摘要：本发明提供了一种Ago蛋白的用途及组合物和基因编辑方法，本发明的真核细胞靶向基因编辑方案，通过使外源Ago蛋白与同源重组片段出现于真核细胞中，进行所述细胞内的基于同源重组的靶向基因编辑，其不需要向导DNA或向导RNA的靶向定位，仅需外源Ago蛋白与同源重组片段便可引发真核细胞的基因编辑，应用前景广泛。

主权项：1.一种Ago蛋白的用途，其特征在于：所述Ago蛋白用于真核细胞内的不依赖于外源靶向向导的基于同源重组的can1基因的靶向基因编辑；所述真核细胞为酿酒酵母细胞；所述Ago蛋白为HpAgo，以XHR为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为MaAgo，以WHR、XHR为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为HeAgo，以XHR、WHR为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为FcAgo，以XHR为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为MtAgo，以XHR、WHR为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为ExAgo，以XHR、XHR200、XHR400为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为PaAgo，以XHR为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为FsAgo，以XHR为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为HpAgoD646A，以XHR为同源重组片段进行基因编辑，或，所述Ago蛋白为ExAgoD398AS400A，以WHR、XHR为同源重组片段进行基因编辑；所述HpAgo的NCBI登录号为ELZ29017.1；所述MaAgo的NCBI登录号为WP_012265209.1；所述HeAgo的NCBI登录号为WP_094494460.1；所述FcAgo的NCBI登录号为WP_106331578.1；所述MtAgo的NCBI登录号为WP_027844945.1；所述ExAgo的NCBI登录号为ACQ71053.1；所述PaAgo的NCBI登录号为WP_046101283.1；所述FsAgo的NCBI登录号为WP_026705043.1；所述HpAgoD646A来自常温菌的HpAgo的突变体，该HpAgo的NCBI登录号为ELZ29017.1；所述ExAgoD398AS400A来自嗜热菌的ExAgo的突变体，该ExAgo的登录号为ACQ71053.1；所述WHR、所述XHR、所述XHR200和所述XHR400的基因序列均由上同源臂、外源序列和下同源臂组成；所述WHR的上同源臂为can1基因自5’端至3’端的第1位至第612位碱基对,所述WHR的外源序列为自5’端至3’端序列为GATTGATAACTAGGCTGACGGGGT的碱基对，所述WHR的下同源臂为can1基因自5’端至3’端的第1140位至第1773位碱基对；所述XHR的上同源臂为can1基因自5’端至3’端的第201位至第825位碱基对,所述XHR的外源序列为自5’端至3’端序列为GATTGATAACTAGGCTGACGGGGT的碱基对,所述XHR的下同源臂为can1基因自5’端至3’端的第850位至第1463位碱基对；所述XHR200的上同源臂为can1基因自5’端至3’端的第554位至第825位碱基对,所述XHR200的外源序列为自5’端至3’端序列为GATTGATAACTAGGCTGACGGGGT的碱基对,所述XHR200的下同源臂为can1基因自5’端至3’端的第850位至第1099位碱基对；所述XHR400的上同源臂为can1基因自5’端至3’端的第387位至第825位碱基对,所述XHR400的外源序列为自5’端至3’端序列为GATTGATAACTAGGCTGACGGGGT的碱基对,所述XHR400的下同源臂为can1基因自5’端至3’端的第850位至第1343位碱基对。

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