申请/专利权人：上海药明生物医药有限公司

申请日：2021-11-08

公开（公告）日：2023-10-13

公开（公告）号：CN114088947B

主分类号：G01N33/68

分类号：G01N33/68;G01N21/552

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.10.13#授权;2022.03.15#实质审查的生效;2022.02.25#公开

摘要：本发明公开了一种利用混合抗体捕获法筛选VHHscFv的方法，包括以下步骤：首先，优化混合抗体的捕获条件，其次，在最优的捕获条件下，将一定比例混合的多种抗体共价偶联到芯片上，通过混合抗体同时捕获带有相应标签的VHHscFv，最后，将抗原作为分析物进行SPR检测。本发明提供的筛选方法能够稳定捕获VHHscFv，操作上无需对VHHscFv进行纯化或IgG构建，节省了时间和成本，并且可以防止遗漏表达较差但亲和力较好的样品，有助于抗体研发阶段大量VHHscFv样品的动力学结合检测和筛选。

主权项：1.一种利用混合抗体捕获法筛选VHHscFv的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）优化捕获条件：先将单独的抗Myc标签抗体和单独的抗His标签抗体以不同比例混合，获得混合抗体，对芯片进行活化后，再使用所述混合抗体包被于所述芯片上，使用缓冲液将VHH稀释至不同浓度，使VHH流经所述芯片，并与包被在芯片上的抗体发生特异性结合，进行SPR检测并分析计算包被抗体与VHH的表观解离速率常数即表观kd；比较混合比例不同的抗体和不同浓度VHH的表观解离速率常数，选取使用不同浓度VHH时表观解离速率常数都较小的混合比例作为最优捕获条件；2）在最优捕获条件下，利用混合抗体捕获法进行VHHscFv的筛选：先将抗Myc标签抗体和抗His标签抗体以步骤1）中获得的最优混合比例混合，再将混合抗体包被到活化后的芯片上，使VHHscFv流经所述芯片，并与包被在芯片上的混合抗体发生特异性结合；以不同浓度的抗原作为分析物进行SPR检测，分析计算VHHscFv与抗原的解离速率常数kd，所述抗原为不含有Myc标签和His标签的抗原。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海药明生物医药有限公司 一种利用混合抗体捕获法筛选VHH/scFv的方法

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