申请/专利权人：河南农业大学

申请日：2020-12-31

公开（公告）日：2023-10-24

公开（公告）号：CN112795589B

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/53;A01H6/82;A01H5/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.10.24#授权;2021.06.01#实质审查的生效;2021.05.14#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，涉及烟叶改良的非转基因方法，特别是指一种抑制烟叶烘烤变黑的非转基因混合侵染方法及其应用。根据NtPPO2、NtPPO7基因全长序列设计VIGS引物对；以K326烟草cDNA为模板，以引物对为引物，PCR扩增目标片段NtPPO2基因片段和NtPPO7基因片段；将目标片段NtPPO2基因片段和NtPPO7基因片段分别与pTRV2‑VIGS载体相连，构建pTRV2‑NtPPO2‑VIGS载体和pTRV2‑NtPPO7‑VIGS载体；最后将两个VIGS载体混合侵染烟叶。本发明根据VIGS原理，并没有将外源DNA整合到植物基因组中，抑制烟叶烘烤变黑的情况发生，提高烟叶烘烤的质量。

主权项：1.一种提高NtPPO2和NtPPO7基因抑制效果的方法，其特征在于，步骤如下：（1）根据NtPPO2、NtPPO7基因全长序列设计VIGS引物VIPPO2-XbaI-F、VIPPO2-BamHI-R、VIPPO7-XbaI-F和VIPPO7-BamHI-R；（2）以K326烟草cDNA为模板，以步骤（1）的引物为引物，PCR扩增目标片段NtPPO2基因片段和NtPPO7基因片段；（3）将步骤（2）的目标片段NtPPO2基因片段和NtPPO7基因片段分别与pTRV2-VIGS载体相连，构建pTRV2-NtPPO2-VIGS载体和pTRV2-NtPPO7-VIGS载体；（4）将pTRV2-NtPPO2-VIGS载体和pTRV2-NtPPO7-VIGS载体混合侵染烟叶；所述步骤（1）中VIPPO2-XbaI-F序列如SEQIDNo.3所示、VIPPO2-BamHI-R序列如SEQIDNo.4所示、VIPPO7-XbaI-F序列如SEQIDNo.5所示、VIPPO7-BamHI-R序列如SEQIDNo.6所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南农业大学 一种抑制烟叶烘烤变黑的非转基因混合侵染方法及其应用

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