申请/专利权人：郑州轻工业大学

申请日：2023-08-11

公开（公告）日：2023-11-10

公开（公告）号：CN117030887A

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72;G01N30/86

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.11.28#实质审查的生效;2023.11.10#公开

摘要：本发明公开了一种山药块茎木栓化组织中木栓质单体含量的测定方法，木栓质是一种大分子聚酯，单体主要以氧酯键共价连接，其脂肪族化合物与细胞壁中多糖成分已糖苷键连接定位在细胞壁内侧，因此要测定木栓质单体成分首先要破坏植物细胞结构，然后水解木栓质单体之间的氧酯键释放出木栓质单体成分。本发明首先利用超声波预处理破坏植物细胞，随后利用脂肪酶水解并结合超声波辅助和酸水解（硫酸甲醇）将木栓质充分、高效的水解成单体，所用试剂相对安全无毒性，操作比较简单，解决了山药块茎损伤愈合木栓质代谢研究中木栓质单体含量测定困难的技术难题。

主权项：1.一种山药块茎木栓化组织中木栓质单体含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：（1）山药块茎处理及木栓化组织获取；（2）组织样品中木栓质积累的确定；（3）组织样品中木栓质单体含量测定，包括：a）超声预处理：称取0.2g组织样品液氮下研磨成粉末状，然后加入8mL的醋酸缓冲溶液，进行超声处理；b）酶解：向超声处理后的醋酸缓冲溶液体系中加入10~50mg脂肪酶，30℃~50℃磁力搅拌24~96h，随后离心处理，弃上清后加入5mL超纯水，涡旋2min后离心处理，重复洗涤3次，氮气吹干沉淀得到干燥样品；c）超声辅助解聚：向干燥样品中加入4mL硫酸和甲醇的混合溶液，同时加入十七烷酸甲酯作为内标物，超声处理后孵育，然后加入3mL0.9%wt的氯化钠溶液和8mL二氯甲烷，涡旋震荡混合均匀，离心处理，收集有机相，并用3mL0.5molL氯化钠溶液洗涤2次，加入1g无水硫酸钠去除有机相中的水分，氮气吹干得到解聚后干燥样品；d）衍生化：向解聚后干燥样品中加入100μLN,O-双（三甲基甲硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）和100μL吡啶，并在70°C~110°C下孵育15-40min，冷却至室温后，将衍生物在氮气流下吹干，最后将干燥的衍生物溶解在0.5mL的二氯甲烷中；e）进行气相色谱-质谱分析；f）数据分析。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 郑州轻工业大学 一种山药块茎木栓化组织中木栓质单体含量的测定方法

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