申请/专利权人：浙江省亚热带作物研究所(浙南林业科学研究院)

申请日：2023-10-18

公开（公告）日：2023-11-28

公开（公告）号：CN117126844A

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.12.15#实质审查的生效;2023.11.28#公开

摘要：本发明公开了一种海滨木槿的RNA提取方法，包括研磨样品、裂解细胞、沉淀蛋白、沉淀RNA、清洗RNA、溶解RNA、RNA完整性检测。与现有技术相比，本发明通过对海滨木槿RNA提取方法的改进，可以大大提高海滨木槿RNA质量；提取的高质量的RNA对海滨木槿转录调控等分子研究奠定良好基础。

主权项：1.一种海滨木槿的RNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、选取幼嫩的海滨木槿叶片于研钵中，在研钵中加入液氮使叶片充分研磨成海滨木槿叶片干粉；S2、取0.1g海滨木槿叶片干粉作为样品装入1.5ml离心管中，向样品中加入700ul裂解液，震荡混匀，60℃水浴5min；S3、向样品中加入700ul氯仿，震荡10-15min，在4℃、12000rpm转速下离心5min，取上清液；S4、将步骤S3的上清液移至新1.5ml离心管中，加入700ul氯仿，再次震荡10-15min，在4℃、12000rpm转速下离心5min，取上清液；S5、将步骤S4的上清液移至新1.5ml离心管中，加入4℃预冷的等体积异丙醇，混匀后置于4℃或-20℃放置10-20min；S6、在4℃、12000rpm转速下离心10min，弃上清，收集沉淀后置于冰上，以保证RNA不被降解；S7、向沉淀中加入1ml75％DEPC酒精，在4℃、12000rpm转速下离心10min，弃废液，收集沉淀；并重复操作1-3次；其中75％DEPC酒精为用DEPC水配置的体积分数为75％的酒精；S8、将步骤S7收集的沉淀空离2min，吸出液体，冰上静置5-10min，于超净台中吹干乙醇；S9、向吹干乙醇的沉淀中加入30-50ulDEPC水溶解沉淀，并进行RNA完整性检测后，得到海滨木槿的RNA；其中DEPC水为100ml超纯水中加入100ulDEPC混匀后沉淀过夜，121℃灭菌20min制成。

全文数据：

权利要求：

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