申请/专利权人：深圳大学

申请日：2023-07-06

公开（公告）日：2023-12-08

公开（公告）号：CN116590387B

主分类号：C12Q1/6844

分类号：C12Q1/6844;C12Q1/6827;C12Q1/6851

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.08#授权;2023.09.01#实质审查的生效;2023.08.15#公开

摘要：本发明提供了一种基于CRISPR系统的ssDNA检测方法及应用。所述ssDNA检测方法将Cas13a蛋白直接用于ssDNA的检测：待检测的靶标ssDNA能够与Cas13a蛋白、crRNA形成核糖核蛋白复合物，并激活Cas13a蛋白的反式切割活性，快速切割RNA核酸探针产生荧光信号。由于Cas13a的活性区域仅包含RNA切割活性，所以ssDNA激活Cas13a后并不会被顺式切割，因此本发明提供的检测方法实现了对于靶标ssDNA的无破坏检测，并显著提高了ssDNA检测灵敏度和单碱基错配识别能力，而且设计灵活性高，成本低廉，操作简便，未来在分子诊断、病毒示踪、DNA表达干扰等领域具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种基于检测ssDNA的CRISPRCas13a系统检测基因点突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：同时提供野生型和突变型ssDNA检测体系，所述野生型ssDNA检测体系包括Cas13a蛋白、带有荧光标记的单链RNA探针和野生型crRNA；所述突变型ssDNA检测体系包括Cas13a蛋白、带有荧光标记的单链RNA探针和突变型crRNA；采用PCR不对称扩增将待检测样品制备成ssDNA后分别加入到所述野生型和突变型ssDNA检测体系中，并根据荧光信号检测结果对所述待检测样品进行基因型鉴定；其中，所述点突变为rs199476104或rs4986893，当所述点突变为rs199476104时，野生型crRNA的序列如SEQIDNO.26所示，突变型crRNA的序列如SEQIDNO.27所示，所述PCR不对称扩增的引物对序列如SEQIDNO.28和SEQIDNO.29所示；所述点突变为rs4986893时，野生型crRNA的序列如SEQIDNO.32所示，突变型crRNA的序列如SEQIDNO.33所示，所述PCR不对称扩增的引物对序列如SEQIDNO.34和SEQIDNO.35所示；所述Cas13a蛋白为LbuCas13a，所述方法为非疾病诊断治疗目的。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 深圳大学 一种基于CRISPR系统的ssDNA检测方法及应用

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