申请/专利权人：吉林国安药业有限公司

申请日：2023-10-30

公开（公告）日：2023-12-15

公开（公告）号：CN117230211A

主分类号：C12Q1/6888

分类号：C12Q1/6888;C12Q1/686;C12Q1/6806

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.01.02#实质审查的生效;2023.12.15#公开

摘要：本发明提供了一种鹿花盘DNA真伪鉴定方法，本发明属于中药材鉴定技术领域，用此方法可鉴别鹿花盘的真伪，包括DNA提取、PCR引物设计与合成、鹿花盘PCR反应、结果观察四个部分。通过此方法，可完成对鹿花盘样品真伪的鉴别，本发明具有操作简单、特异性强、便于普及应用的优点。

主权项：1.一种鹿花盘DNA真伪鉴定方法，其特征在在于，包括以下步骤：S1：DNA提取；1样本裂解：将待检样品用70％酒精清洗3min，37℃烘箱中挥发酒精，用剪刀剪碎至1mm3左右，称取样品0.1g放入离心管中，加入500μl裂解液、15μl蛋白酶K20mgml和30μl10％SDS十二烷基磺酸钠，混匀后置于56℃水浴振荡16～18h，转速100rmin；2沉淀：直接向裂解后的样品中加入500μl沉淀液主要含有NaAC，充分混匀，11,000rmin4℃离心10min，取上清液加入等体积的异丙醇，-20℃放置1h，11,000rmin4℃离心10min，弃上清，留沉淀；3洗涤：使用洗涤液主要含有70％乙醇洗涤沉淀两到三次，干燥沉淀，溶于灭菌双蒸水中，-80℃保存，作为检测DNA模板；S2：PCR引物设计与合成；1通过前期实验样品测序分析获得鹿花盘样品COI序列，利用BioEdit软件进行序列比对分析，同时采用Primer3.0https:primer3.ut.ee在线网站设计正品鹿花盘特异性引物，并用Oligo6.0进行再次引物验证；COI:上游引物5'-ACACCCTAATCAACTGGC-3'，下游引物5'-AAGAAAGAAGGAGGGAGG-3'2产物长度为525bp，送由生工生物工程上海股份有限公司完成引物合成；S3：鹿花盘PCR反应；1鹿花盘鉴定体系：总体系为25μl，含有2×TaqPCRMasterMix12.5μl，10nmol·L-1鹿花盘COI引物各1μl，待检样本DNA提取液0.8μl，余为双蒸馏水。2PCR反应程序：将鹿花盘鉴定体系置于PCR反应仪中按下列程序进行:95℃预变性5min，95℃变性30s，退火温度60℃，30s、72℃，30s，循环反应30次，72℃延伸10min；S4：结果观察；取PCR扩增后的反应管中液体5μl，点在经含GelRed染料的2％的琼脂糖凝胶点样孔中，电泳20～30min10Vcm，至蓝色指示剂距点样孔2～4cm时结束电泳，将凝胶置于紫外分析仪上观察，若525bp处出现条带为正品鹿花盘，而伪品和阴性对照无条带。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 吉林国安药业有限公司 一种鹿花盘DNA真伪鉴定方法

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