申请/专利权人：中国科学院武汉植物园

申请日：2020-03-05

公开（公告）日：2023-12-29

公开（公告）号：CN111363781B

主分类号：C12Q1/18

分类号：C12Q1/18;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/16;G01N30/66;G01N30/86;C12R1/145

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.29#授权;2020.07.28#实质审查的生效;2020.07.03#公开

摘要：本发明公开了一种天然产物对厌氧菌抗菌活性的测定方法及其应用，采用顶空气相色谱法测定天然产物与厌氧菌菌液无氧环境共存培养过程中产生的代谢酸与弱碱中和反应生成的CO2含量，根据得到的CO2含量计算天然产物对厌氧菌生长的抑制率和半数抑制浓度。该方法避免了天然产物本身的溶解性和颜色带来的结果不准确的问题，且操作简单，测定精度高，线性响应灵敏，还可应用于药物的抗厌氧菌活性的测定。

主权项：1.天然产物对厌氧菌抗菌活性的测定方法，其特征是，采用顶空气相色谱法测定天然产物与厌氧菌菌液无氧环境共存培养过程中产生的代谢酸与弱碱中和反应生成的CO2含量，根据得到的CO2含量计算天然产物对厌氧菌生长的抑制率和半数抑制浓度，包括以下步骤：（1）确定厌氧菌菌液培养至稳定期的时间：取厌氧菌菌液于灭菌后的顶空瓶中，在一定温度下培养不同时间后，用注射器注入足量的碳酸氢钠溶液，置于顶空气相色谱仪中测定CO2的含量，根据得到的CO2含量确定厌氧菌培养至稳定期的时间；（2）在步骤（1）所述培养时间内确定厌氧菌代谢产生有机酸量，得到完全中和有机酸所需要加入的弱碱量：所述弱碱为碳酸氢钠溶液，取厌氧菌菌液于灭菌后的顶空瓶中在一定温度下培养至稳定期，用注射器注入相同体积不同浓度的碳酸氢钠溶液，于顶空气相色谱仪中测定CO2的含量，根据得到的CO2含量确定完全中和代谢有机酸酸所需加入的碳酸氢钠量；（3）实验组中将等量的厌氧菌菌液分别与不同浓度的天然产物在灭菌后的顶空瓶中无氧培养至步骤（1）确定的时间；并设置对照组与空白组，所述对照组中不添加天然产物，空白组中只含有与实验组相同量的培养基；（4）培养结束后在实验组、对照组和空白组的顶空瓶加入步骤（2）确定的弱碱量，立即置于顶空进样器中，进行顶空气相色谱分析，采集CO2色谱峰信息；（5）根据采集气相色谱图积分CO2色谱峰面积，通过所述CO2色谱峰面积计算得到天然产物对厌氧菌生长的抑制率，根据抑制率计算得到天然产物对厌氧菌生长的半数抑制浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院武汉植物园 天然产物对厌氧菌抗菌活性的测定方法及其应用

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