申请/专利权人：中国医学科学院医学生物学研究所

申请日：2022-04-19

公开（公告）日：2023-12-29

公开（公告）号：CN115074330B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N15/85;C12N15/52

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.29#授权;2022.10.25#实质审查的生效;2022.09.20#公开

摘要：本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种基于遗传密码子扩展技术的改造Vero细胞系，所述改造Vero细胞系的构建方法是基于基因密码子扩展技术，使用PylRStRNAPyl系统，定点插入一套能翻译终止密码子的序列，所述能翻译终止密码子序列如SEQIDNO.1所示，该改造细胞系，在加入到特殊培养基后，限制性病毒仅能在改造细胞中增殖，但不在天然细胞中增殖，由此建立一个隔离在天然翻译系统之外的安全的病毒扩增和研究体系。本研究将通过：调整启动子，密码子偏好性，培养方案等工作，来建立以改造Vero细胞株为核心的正交系统。这个有效且安全的正交系统，不仅使我们在不接触野生病原的情况下在普通实验室研究病毒与细胞的相互关系，并且有可能大量培育这种限制性病毒来作为新型疫苗。

主权项：1.一种基于遗传密码子扩展技术的改造Vero细胞系，其特征在于，所述改造Vero细胞系的构建方法是基于基因密码子扩展技术，使用CRISPRCas9系统将携带PylRStRNAPyl系统的质粒插入到Vero细胞株中，定点插入一套能翻译终止密码子的序列，所述翻译终止密码子的序列由2个隔离子、1个CAG启动子、1个马氏甲烷八叠球菌吡咯赖氨酸tRNA合成酶基因、1个WPRE转录后调控序列、1个ployA序列、4个hU6启动子-马氏甲烷八叠球菌吡咯赖氨酸tRNA基因序列组成，所述翻译终止密码子的序列的碱基如SEQIDNO.1所示；SEQIDNO.1所示序列定点插入的位置为PPP1R12C蛋白基因的第一个内含子内AAVS1位点，具体插入位置为NW_023666045.1，263811bp处；所述CRISPRCas9系统的sgRNA的序列为GCCCAAATTAAAGAAGTGAGAGG。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国医学科学院医学生物学研究所 一种基于遗传密码子扩展技术的改造Vero细胞系

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