申请/专利权人：中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)

申请日：2023-02-28

公开（公告）日：2023-12-29

公开（公告）号：CN116286926B

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N15/65;C12Q1/689;C12Q1/6897;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.29#授权;2023.07.11#实质审查的生效;2023.06.23#公开

摘要：本发明公开了一种双荧光报告质粒、质粒的构建以及在检测大肠杆菌胞内c‑di‑GMP水平中的应用。该报告质粒由抗性基因、启动子、第一报告基因、终止子、第二报告基因、核糖开关组成。含有的两个报告基因mCherry和EGFP，分别受启动子和核糖开关控制，第一报告基因用于检测质粒本底表达水平，第二报告基因用于检测c‑di‑GMP水平，且第一报告基因和第二报告基因的方向相反，二者的表达互相不受干扰，可消除质粒拷贝数对c‑di‑GMP水平检测结果的影响，检测结果更准确、更可靠。本发明构建的双荧光报告质粒可以对大肠杆菌胞内c‑di‑GMP水平进行快速检测，操作简单，结果可靠。

主权项：1.一种用于检测大肠杆菌胞内c-di-GMP水平的双荧光报告质粒pAmCherry-Vc2EGFP，简称pACVcE，其特征在于，该报告质粒由依次连接的抗性基因、启动子、第一报告基因、终止子、第二报告基因、核糖开关组成；该报告质粒含有两个报告基因，分别受启动子和核糖开关控制，第一报告基因用于检测质粒本底表达水平，第二报告基因用于检测c-di-GMP水平，且第一报告基因和第二报告基因的方向相反，二者的表达互相不受干扰，可消除质粒拷贝数对c-di-GMP水平检测结果的影响；所含的抗性基因为氯霉素和四环素抗性基因，所述的启动子为Pbla启动子，即Amppromoter，所述的第一报告基因为mCherry红色荧光蛋白基因，所述的终止子为T7终止子，所述的核糖开关为c-di-GMP核糖开关，简称Vc2核糖开关，所述的第二报告基因为EGFP绿色荧光蛋白基因；所述的氯霉素和四环素抗性基因片段如序列表中SEQIDNo.11所示，所述的Pbla启动子的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.12所示，所述的mCherry和T7终止子核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.13所示，所述的EGFP绿色荧光蛋白基因的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.14所示，所述的Vc2核糖开关核苷酸序列如序列表中SEQIDNo.15所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) 一种双荧光报告质粒的构建及其在检测大肠杆菌胞内c-di-GMP水平中的应用

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