申请/专利权人：广州市基准医疗有限责任公司

申请日：2022-07-28

公开（公告）日：2024-01-30

公开（公告）号：CN117467740A

主分类号：C12Q1/6806

分类号：C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.08#实质审查的生效;2024.01.30#公开

摘要：本发明涉及一种具有独特分子标签UMI设计的多样本多位点DNA甲基化检测方法和检测试剂盒，所述检测方法包括以下步骤：提取样本基因组DNA，对提取的DNA进行转化处理，然后在转化后的DNA片段的3端连接接头序列并进行模板扩增；对获得的模板扩增产物进行多重PCR以获取多位点序列，再进行产物纯化；对获得的纯化产物进行测序文库构建并完成待测位点甲基化水平检测。本发明所述检测方法和试剂盒可以同时对多样本多基因的DNA甲基化进行检测，通过UMI的去重处理得到待测甲基化位点的原始拷贝数信息，减小因mPCR过程中的扩增效率差异以及建库过程中引入的批次效应的影响，将使分析结果更加准确可信。

主权项：1.一种具有独特分子标签的多样本或多位点DNA甲基化的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.提取样本基因组的DNA或cfDNA，对提取的DNA或cfDNA使用化学方法或酶法进行重亚硫酸盐转化处理，得到转化后的DNA片段；S2.然后通过在转化后的DNA片段的3’末端连接接头序列进行预文库构建，所述接头序列包括至少一对由上链序列和下链序列构成的序列，所述每条上链序列从5’端至3’端包含：长度为9-15个碱基的能与下链序列完全互补配对的连接序列、6-10bp的随机序列作为独特分子标签、通用序列的反向互补序列；所述每条下链序列从5’端至3’端包括：长度为9-15个碱基的能与上链序列完全互补配对连接序列、6-12bp相同碱基的重复序列；所述每条上链序列和下链序列的3’端分别有间隔子修饰；S3.对步骤S2获得的预文库通过针对目的基因或目的甲基化位点的特异性上游引物和下游的通用序列进行多重PCR以获取多位点序列，再进行产物纯化；S4.对步骤S3获得的纯化产物进行测序文库构建，并完成待测位点甲基化水平检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广州市基准医疗有限责任公司 具有独特分子标签的多样本多位点DNA甲基化检测方法和试剂盒

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