申请/专利权人：昆明理工大学

申请日：2021-09-16

公开（公告）日：2024-01-30

公开（公告）号：CN113736724B

主分类号：C12N5/07

分类号：C12N5/07

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.30#授权;2021.12.21#实质审查的生效;2021.12.03#公开

摘要：本发明公开了一种提取赤拟谷盗及雷氏黄萤线粒体的方法，该方法是将赤拟谷盗成虫或雷氏黄萤幼虫组织匀浆后，采用差速离心和Nycodenz密度梯度离心的方法，获得纯化线粒体；本发明方法对线粒体的损伤小，提取的线粒体活性高，对线粒体以外的细胞核、内质网、细胞膜或胞浆蛋白组分等分离较为彻底；获得的线粒体具有高纯度、高活性等特性；这对后续的昆虫分子生物学实验的研究奠定了基础。

主权项：1.一种提取赤拟谷盗或雷氏黄萤线粒体的方法，其特征在于，步骤如下：（1）在赤拟谷盗成虫或雷氏黄萤幼虫中添加STE缓冲液混匀后，4℃下匀浆，制得匀浆液，匀浆液在4℃、1000～1200g下离心5min，收集上清液在4℃、1000～1200g下离心5min，收集上清液在4℃、12000～15000g下离心10min，收集沉淀，得到粗提线粒体；（2）将粗提线粒体用预冷至4℃的25%Nycodenz溶液悬浮，得到粗提线粒体悬浮液，在离心管中将密度梯度介质铺层，即沿管壁缓慢依次加入密度梯度介质1mL34%Nycodenz溶液、1.6mL30%Nycodenz溶液、2.4mL粗提线粒体悬浮液、1.6mL23%Nycodenz溶液、0.6mL20%Nycodenz溶液，然后进行密度梯度离心，收集处于20%和23%溶液之间条带的溶液，该溶液经4℃、12000～15000g离心10min，收集沉淀，即得赤拟谷盗或雷氏黄萤的线粒体；所述密度梯度离心是在4℃、100000g下离心1～1.5h；所述STE缓冲液是将150mL100mmolL三羟甲基氨基甲烷溶液与150mL10mmolL乙二胺四乙酸二钾溶液混合，然后添加蔗糖164.3g，混匀后调节pH为7.4，制得；所述密度梯度介质用STE缓冲液配制。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 昆明理工大学 一种提取赤拟谷盗或雷氏黄萤线粒体的方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD