申请/专利权人：锡林郭勒职业学院;锡林郭勒盟坤源生物科技有限公司

申请日：2022-05-31

公开（公告）日：2024-01-30

公开（公告）号：CN114854898B

主分类号：C12Q1/6895

分类号：C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.30#授权;2022.08.23#实质审查的生效;2022.08.05#公开

摘要：本发明公开了一种同时检测蒙古白丽蘑和双孢蘑菇真实性的引物和探针，引物和探针序列如下：正向引物序列如SEQIDNo.1所示；反向引物序列如SEQIDNo.2所示；蒙古白丽蘑探针序列如SEQIDNo.3所示；双孢蘑菇探针序列如SEQIDNo.4所示；质控探针序列如SEQIDNo.5所示。本发明的引物、探针的特异性好、灵敏度高，可以实现蒙古白丽蘑、双孢蘑菇以及质控同管检测，并且可以进行蒙古白丽蘑和双孢蘑菇的定量检测。

主权项：1.蘑菇中蒙古白丽蘑、双孢蘑菇以及质控同管检测的方法，其特征在于，步骤如下：（1）提取蘑菇样品的DNA，设立提取的空白对照；（2）以步骤（1）的DNA为模板，利用SEQIDNo.1~SEQIDNo.5的引物和探针进行多重荧光定量PCR扩增，以蒙古白丽蘑和双孢蘑菇的阳性标准品作为阳性对照，以灭菌的去离子水作为阴性对照，以DNA提取的空白对照作为提取方法的对照组；（3）Real-timePCR反应结束后，设置Threshold为自动，读取蒙古白丽蘑、双孢蘑菇和质控相应探针的Ct值以及阳性对照、阴性对照和空白对照的Ct；只有当质控Ct≤40和阳性对照Ct≤40，阴性对照和空白对照Ct为0时才可以进行相应蘑菇探针结果的判定；当相应探针的Ct≤40，结果判定为具有相应蘑菇源性，同时有多个探针的Ct≤40，结果判定为具有相应两蘑菇源性；（4）利用蒙古白丽蘑和双孢蘑菇阳性标准品做DNA定量的标准曲线；（5）利用蘑菇中的相应蘑菇源性的Ct值和标准曲线中的公式可以得到蘑菇中相应蘑菇源性的定量检测结果；Real-timePCR扩增参数为：预变性温度94℃，30s，变性温度94℃，5s，退火延伸温度60℃，31s，40个循环；Real-timePCR反应体系为：ProbeqPCR预混液10μL；SEQIDNo.1所示的正向引物1μL，浓度为10μmolL；SEQIDNo.2所示的反向引物1μL，浓度为10μmolL；SEQIDNo.3所示的蒙古白丽蘑探针0.5μL，浓度为10μmolL；SEQIDNo.4所示的双孢蘑菇探针0.5μL，浓度为10μmolL；SEQIDNo.5所示的质控探针0.5μL，浓度为10μmolL；DNA模板2μL；和灭菌的去离子水4.5μL，总体积20μL。

全文数据：

权利要求：

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