申请/专利权人：沈阳农业大学

申请日：2021-09-07

公开（公告）日：2024-02-02

公开（公告）号：CN113774146B

主分类号：C12Q1/6888

分类号：C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.02#授权;2021.12.28#实质审查的生效;2021.12.10#公开

摘要：本发明属于分子生物学领域，具体涉及用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其15‑plex快速分型检测方法。本发明选用15个四碱基重复微卫星标记结合多重PCR技术,研发了一套猫个体识别和亲子鉴定快速检测方法。包括：确定猫的14个微卫星位点和1个性别鉴定位点并将所述14对微卫星引物和1对性别鉴定位点引物合成15对荧光标记引物、PCR扩增得到14条目标微卫星序列和1个性别鉴定位点序列及检测结果分析步骤。本发明可实现一次PCR反应即获得14个猫四碱基微卫星标记的分型结果，同时鉴定性别，扩增结果稳定且具较高的灵敏度，可用于猫的个体识别和亲子鉴定。

主权项：1.一种用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组15-plex快速分型检测方法，其特征在于，确定猫的14个微卫星位点和1个性别鉴定位点并将所述14个微卫星位点和1个性别鉴定位点的引物合成为15对荧光标记引物、PCR扩增得到14条目标微卫星序列和1个性别鉴定位点序列及检测结果分析步骤，用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组由14对微卫星引物序列和1对性别鉴定引物序列构成，引物序列及其所携带的荧光标记为：微卫星位点FCA559，引物序列F:TGTTCAAGAGTGGTTATCACTAG，R:GTAAGTTTTGGCTTGATGAG；产物范围211-239bp，引物终浓度180nML，携带标记为FAM；微卫星位点FCA747，引物序列F:AAGAAACTTCATACCCATTAGC，R:TCTGATATTCTCCTCAATGATG；产物范围188-204bp，引物终浓度145nML，携带标记为FAM；微卫星位点FCA740，引物序列F:CCACAGGTAAACATCAACC，R:ACATCTCCACATCTGTAGCC；产物范围249-268bp，引物终浓度110nML，携带标记为FAM；微卫星位点F27，引物序列F:CAGACTACTTTAGGTGCTACAAG，R:AAAGTTTAGAACTGATGTCTTTG；产物范围351-435bp，引物终浓度280nML，携带标记为FAM；微卫星位点F37，引物序列F:TCTCACATTACCATTCATCC，R:GGCTGGAAATAAGATTTGG；产物范围453-479bp，引物终浓度750nML，携带标记为FAM；微卫星位点FCA742，引物序列F:GTCTTGACAACGCATAAGAAC，R:ACCAGGAACACCATGTTG；产物范围114-160bp，引物终浓度130nML，携带标记为HEX；微卫星位点FCA734，引物序列F:GTTTTCTATCTTTCTGTATTGCTAG，R:GAGGGGTCAGGACTTTAAC；产物范围175-199bp，引物终浓度110nML，携带标记为HEX；微卫星位点F42，引物序列F:CAGCTCAGCACAGTGCTAC，R:AACTGCACAAATTAAGAGGC；产物范围241-269bp，引物终浓度100nML，携带标记为HEX；微卫星位点F141，引物序列F:CTTGGTTGAGTATAGAGGTAAAAG，R:AGTTACACCCATTCAAGTATG；产物范围290-349bp，引物终浓度200nML，携带标记为HEX；微卫星位点FCA730，引物序列F:AGTGGATGGAGCATTCG，R:ACTCCATATTTGTTATAGGACG；产物范围383-413bp，引物终浓度120nML，携带标记为HEX；微卫星位点FCA744，引物序列F:ATTCACGAAGTGGTATCACG，R:CTACAGCCTACTTGAAGATTGT；产物范围442-466bp，引物终浓度100nML，携带标记为HEX；微卫星位点FCA749，引物序列F:GCAGTGATTCCTTCAGACTG，R:AAGAGCATGCGTTCTCTG；产物范围84-254bp，引物终浓度120nML，携带标记为ROX；微卫星位点FCA441，引物序列F:GGTTAGTGGGTGTGCTTG，R:CATCAGCACTCTCAAAAATC；产物范围301-329bp，引物终浓度220nML，携带标记为HEX；微卫星位点FCA733，引物序列F:TAGGCTCCTCTAGGTTTACTG，R:GGTTTGTGTGTTTGGGTTAG；产物范围347-443bp，引物终浓度120nML，携带标记为ROX；微卫星位点AMEL，引物序列F:TTCCCCTCYATAAAAGCTACC，R:SAGGAGAAACTGAGTCAGAGA；产物范围258-279bp，引物终浓度120nML，携带标记为ROX；所述PCR扩增得到14条目标微卫星序列和1个性别鉴定位点序列，按照如下步骤进行：猫的微卫星15重PCR扩增：使用上述位点合成的15对荧光标记引物，按照各自确定的引物终浓度，配成引物混合液加入反应体系，反应体系为15ul：引物混合液5.8ul、DNA聚合酶2×EasyTaqPCRSuperMix,8.2ul、1～50ng待测猫DNA1ul；PCR扩增程序为：95℃10分钟；95℃45秒，57℃45秒，72℃45秒，共30个循环；72℃40分钟；4℃保持；通过一次PCR扩增得到14条目标微卫星序列和1个性别鉴定位点序列；所述检测结果分析步骤，按照如下方法进行：使用ABI3730xl测序仪和Genemapperv4.0软件检测上述PCR产物，获得待测样品在14个微卫星位点和1个性别鉴定位点上的基因分型；对比两个样本在14个微卫星位点上的基因型结果，如果完全一致，判断为同一个体，反之不是同一个体；对比子代样本与亲代样本在14个微卫星位点上的基因分型结果，根据等位基因的遗传定律判断二者的亲子关系；根据AMEL位点的分型结果判断样品性别。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 沈阳农业大学 用于猫个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其15-plex快速分型检测方法

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