申请/专利权人：烟台大学

申请日：2024-01-12

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117867131A

主分类号：C12Q1/6888

分类号：C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种利用微卫星荧光多重PCR技术进行绿鳍马面鲀亲子鉴定的方法。其特征在于，包括以下步骤：1绿鳍马面鲀个体DNA提取；2绿鳍马面鲀多态性微卫星引物的筛选；3多重PCR体系的摸索和确定；4获得绿鳍马面鲀样本的基因型数据及亲子鉴定。本发明具有准确、高效等特点，能对绿鳍马面鲀进行亲子鉴定，还能用于家系管理和增殖放流效果评估。

主权项：1.一种绿鳍马面鲀亲子鉴定微卫星荧光多重PCR的方法，其特征在于，包括以下步骤：1绿鳍马面鲀个体DNA提取取绿鳍马面鲀亲本和子代的鳍条，采取苯酚-氯仿法提取基因组DNA，浓度调整为50nguL；2绿鳍马面鲀多态性微卫星引物的筛选筛选现有文献记载及实验室开发的绿鳍马面鲀微卫星标记引物序列，并确保目的片段长度存在100bp-500bp的差异，引物序列送生物公司合成。用步骤1获得的基因组DNA为模板，对合成的引物用绿鳍马面鲀个体进行PCR扩增，利用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，筛选出扩增稳定、特异性强的引物；3多重PCR体系的摸索和确定对步骤2中筛选得到的引物按照扩增后的PCR产物片段大小进行初步分组，以引物退火温度相近、产物片段大小差异明显为原则，首先对引物进行两两组合，选出扩增清晰的组合，再进行3个位点的多重PCR体系的摸索和构建；然后优化退火温度、引物浓度的反应条件，最终将9个微卫星位点组成3组多重PCR体系，多重PCR组合1引物为KTm25、KTm223、KTm255；多重PCR组合2引物为KTm141、KTm279、KTm260；多重PCR组合3引物为Namo77、Namo85、KTm240，所述引物KTm25、KTm223、KTm255、KTm141、KTm279、KTm260、Namo77、Namo85、KTm240的正向和反向引物序列分别如SEQ.ID.NO.1～SEQ.ID.NO.18所示，其中每一对引物的正向引物的5’端添加M13-21通用引物序列，荧光标记添加在M13-21通用引物序列的5’端，所述M13-21通用引物序列的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.19所示4获得绿鳍马面鲀样本的基因型数据及亲子鉴定。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 烟台大学 一种绿鳍马面鲀亲子鉴定微卫星荧光多重PCR的方法

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