申请/专利权人：南京农业大学三亚研究院;歌瑞谱生物科技(南京)有限公司;南京农业大学

申请日：2024-03-14

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117887894A

主分类号：C12Q1/6895

分类号：C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;G16B40/30

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.03#实质审查的生效;2024.04.16#公开

摘要：本发明涉及一种葡萄品种的鉴定方法，该方法的建立首先根据部分选取的SSR标记位点组合将待构建CID的葡萄品种资源通过邻接法聚类，再将大样本分割成多个小类群，进一步利用更多的引物多态性条带有无对每一小类群品种进行区分，构建出每个小类群的CID，进而形成由多个小类群CID组成的适用于其所包含的所有品种的鉴定信息。本发明还公开了如何利用这些小类群CID进行待检测样品的真伪辨别、混淆品种的精准区分以及对待检测未知品种材料的精准鉴定；该发明同样适用于其他果树树种。

主权项：1.一种葡萄品种鉴定图的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）基于葡萄全基因组序列信息，随机挑选分布在葡萄1-19号染色体上的SSR位点，其挑选的位点数量与葡萄品种样本量呈正相关，根据SSR位点选取上下游各100bp设计候选的SSR引物；（2）采集待构建品种鉴定图的葡萄品种资源嫩叶作为植物材料，提取样品基因组DNA；（3）随机选取8-10个样品的基因组DNA对步骤（1）得到的SSR引物进行PCR扩增，根据指纹质量从中筛选出条带稳定、清晰的SSR引物，筛选出的引物如SEQIDNo:1~30所示；（4）以样品基因组DNA为模板，利用如SEQIDNo:1~10所示的SSR引物进行PCR扩增，获得扩增产物；（5）将获得的扩增产物进行凝胶电泳检测并统计目标多态性条带情况；（6）将目标多态性条带统计结果形成10矩阵，利用邻接法进行聚类分析，分成小类群；（7）以各小类群中葡萄品种资源的基因组DNA为模板，再利用如SEQIDNo:11~30所示的部分SSR引物进行PCR扩增，获得扩增产物，并重复步骤（5）；（8）每个小类群的引物多态性条带统计结果用于构建其相对应的品种鉴定图，作为精准鉴定各小类群所包含品种的参考依据：首先利用步骤（7）中的第一对引物扩增的多态性条带对每一小类群品种进行区分，并将该引物代码标注到分类的支线上，同时将目标条带的有、无以及大小分别标注到有带、无带品种群的两条分支线上；利用步骤（7）中的第二对引物对尚未区分的品种进一步分类，依次进行区分直至所有品种分开。

全文数据：

权利要求：

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