申请/专利权人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

申请日：2023-05-19

公开（公告）日：2024-02-02

公开（公告）号：CN116814713B

主分类号：C12P17/14

分类号：C12P17/14;C07D273/08;C12R1/77

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.02#授权;2023.10.24#实质审查的生效;2023.09.29#公开

摘要：本发明公开了一种由燕麦镰孢菌制备恩镰孢菌素的方法，涉及生物技术领域。而本发明提供的恩镰孢菌素的制备方法，采用液体发酵的方式，不产生固体废料，对废液处理更为简便。与固体发酵相比，发酵液中恩镰孢菌素分散均匀，更易提取，产率高，制备时间短，产物杂质少，易分离纯化。具有环境友好、装置简单、工艺操作简便和适合工业化生产的技术优势。本发明提供的制备方法制得的恩镰孢菌素纯度高。

主权项：1.一种由燕麦镰孢菌（Fusariumavenaceum）制备恩镰孢菌素的方法，其特征在于，其包括：培养燕麦镰孢菌，通过液体发酵的方式获得发酵产物，将所述发酵产物进行恩镰孢菌素的粗提，获得粗品；然后将粗品过硅胶层析柱纯化；再将层析纯化后的产物上ODS柱进行纯化，然后将ODS柱层析纯化后的产物上C18依利特色谱柱进行纯化，收集产物；液体发酵所使用的液体生产培养基的pH为6.0-7.0，所述液体生产培养基包括如下原料：每1L水中含：蛋白胨10g,七水硫酸镁0.5，氯化钾0.5g，七水硫酸亚铁10mg,微量元素混合液200μL，葡萄糖30g；每100mL微量元素混合液包括：七水硫酸锌4.5-5.5g，五水硫酸铜0.2-0.3g，一水硫酸锰40-60mg，硼酸40-60mg，二水钼酸钠40-60mg；所述硅胶层析柱层析时包括：先将粗品用体积百分比为15%-20%的甲醇与80%-85%的二氯甲烷的混合溶剂进行溶解，与硅胶混匀后，浓缩，然后浓缩至干的样品上硅胶层析柱纯化，采用体积百分比为3%-5%的甲醇与95%-97%的二氯甲烷的混合溶剂洗脱；所述ODS柱的纯化步骤包括：将硅胶层析柱纯化后的产物用二甲基甲酰胺进行复溶，然后上ODS柱进行纯化；采用85%-90%的甲醇水溶液进行洗脱；洗脱后，将洗脱产物进行浓缩，再用体积百分比为15%-20%的甲醇与80%-85%的二甲基甲酰胺的混合溶剂进行复溶浓缩用于C18依利特色谱柱纯化；所述C18依利特色谱柱纯化所采用的色谱柱为11号依利特制备柱，色谱采用的流动相为水和乙腈，以30-35mlmin的流速进行梯度洗脱，柱温为25-40℃；洗脱程序如下：0-30min流动相中水溶液的体积百分比为20%，流动相中乙腈的体积百分比为80%；30-35min流动相中水溶液的体积百分比从20%降至0%，流动相中乙腈的体积百分比从80%升至100%；35-45min流动相中水溶液的体积百分比为0%，流动相中乙腈的体积百分比为100%；收集19-21min内的洗脱液即为含有恩镰孢菌素B的洗脱液。

全文数据：

权利要求：

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