申请/专利权人：河南牧业经济学院

申请日：2023-11-08

公开（公告）日：2024-02-06

公开（公告）号：CN117510620A

主分类号：C07K16/02

分类号：C07K16/02;C07K16/18;C07K1/30;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/36

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.02.27#实质审查的生效;2024.02.06#公开

摘要：本发明涉及一种抗绵羊Y精子IgY卵黄抗体的制备方法，属于动物繁殖领域。利用免疫学原理和方法，制取抗绵羊Y精子的卵黄抗体，进而对卵黄免疫球蛋白进行分离、浓缩和提纯，通过IgY对非性控精液中X、Y精子的抗原抗体反应，实现性别控制。本发明避免了流式细胞仪进行X、Y精子分离的前期损伤，保证了精液品质；利用免疫学原理和方法分离X、Y精子，操作方便、成本低廉；该精子分离方法具有很好的应用价值。

主权项：1.一种抗绵羊Y精子IgY卵黄抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：1Y精子免疫原制备将流式细胞仪分离好的绵羊Y精子冷冻精液用37～38℃的水浴解冻，用无菌生理盐水对解冻精液按照1：5～10的体积比例稀释，将稀释后的精液2000rmin离心10min后弃上清，再次用无菌生理盐水重悬压积的精子至初次离心前的体积，再次2000rmin离心10min；如此反复4～5次离心至精液上清中无蛋白；将得到的压积精子用生理盐水稀释至2mL，得到Y精子抗原液；2动物免疫采用种鸡产的种蛋经正常孵化，孵化出的雏鸡按正常种鸡场防疫程序免疫，选留雏母鸡作为免疫动物；采用普通免疫程序或强化免疫程序对雏母鸡免疫；普通免疫程序：取23周龄的开产前母鸡300只，胸肌内多点注射Y精子抗原液进行免疫；间隔10天加强免疫1次，连续2次加强免疫后鸡翅静脉采血，收集免疫蛋白，以后间隔1月加强免疫1次，连续免疫6次；强化免疫程序：取23周龄的开产前母鸡300只，胸肌内多点注射Y精子抗原悬液进行免疫；间隔7天加强免疫1次，连续4次加强免疫后鸡翅静脉采血，收集免疫蛋白，以后间隔1月加强免疫1次，连续免疫6次；3卵黄抗体提取免疫Y精子抗原液的母鸡产蛋后，收集鸡蛋中的卵黄稀释，稀释时水和卵黄的质量比为9:1，将稀释的卵黄在室温下培育6h，然后卵黄经4℃离心25min，转速10000rmin，离心后去除沉淀保留上清液，向上清液中添加质量含量19％的硫酸钠溶液，将目标抗体从卵黄中沉淀出来，通过凝胶过滤、离子交换纯化、富集IgY卵黄抗体，最后得到抗绵羊Y精子卵黄抗体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南牧业经济学院 一种抗绵羊Y精子IgY的制备方法

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