申请/专利权人：无锡代际生物科技有限公司

申请日：2021-12-30

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN114295595B

主分类号：G01N21/64

分类号：G01N21/64;G01N15/14;C09K11/65;B82Y20/00;B82Y40/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.09#授权;2022.04.26#实质审查的生效;2022.04.08#公开

摘要：本发明公开了一种活动精子DNA碎片检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包括：Pi检测试剂，其为荧光物质与银的络合物，当Pi存在时，Pi取代络合物中的银，使得被猝灭的荧光物质恢复荧光；酸化液，其包括盐酸、氯化钠和曲拉通X‑100；缓冲液，其包括氯化钠、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和柠檬酸；以及AO染色液。本发明通过因与银形成络合物而应该猝灭的碳量子点作为Pi检测试剂，当存在Pi时，其恢复绿色荧光，从而能够特异性识别活动的精子；基于流式细胞仪，再配合基于吖啶橙染料的精子染色质结构检测方法，能够实现精子活率、活动精子的DNA碎片率的检测，能更直接反应精子的质量，提供更具参考价值的评价指标。

主权项：1.一种活动精子DNA碎片检测试剂盒，其特征在于，包括：Pi检测试剂，其为荧光物质与银的络合物，当Pi存在时，Pi取代络合物中的银，使得被猝灭的荧光物质恢复荧光；酸化液，其包括：0.05-0.2molL的盐酸、0.1-0.5molL的氯化钠和质量分数0.02-0.2％的曲拉通X-100；缓冲液，其包括：0.1-0.5molL的氯化钠、0.2-2mmolL的乙二胺四乙酸、0.005-0.03molL三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.05-0.2molL的磷酸氢二钠和0.05-0.2molL的柠檬酸；以及吖啶橙染色液；所述荧光物质为碳量子点，所述碳量子点通过以下方法制备得到：1将番茄红素、二硫苏糖醇溶于乙醇和水的混合溶液中，超声搅拌至澄清，再加入乙二胺，搅拌1-3分钟；2将步骤1得到的溶液转移到聚四氟乙烯为内衬的反应釜中，在烘箱中加热至130℃-160℃下持续反应4-12小时；3反应结束后，待产物冷却至室温，再用滤膜过滤产物，将滤液冷冻干燥得到粗产品；4将粗产品溶于超纯水中，离心，取滤液用截断分子量为800-1500Da的透析袋透析8-16小时，收集透析袋内溶液，冷冻干燥，即得所述碳量子点；所述Pi检测试剂的制备方法为：将碳量子点溶于去离子水中，搅拌溶解，配置成10μgmL的碳量子点溶液，然后再加入足量的硝酸银，混合得到Pi检测试剂，避光保存。

全文数据：

权利要求：

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