申请/专利权人：武汉核圣生物技术有限公司

申请日：2019-05-24

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN111979225B

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10;C12N15/55

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.01#授权;2020.12.11#实质审查的生效;2020.11.24#公开

摘要：本发明公开低温VSW3RNA聚合酶体外转录合成全长无中断cas9mRNA的应用，所述VSW3RNA聚合酶体外转录合成全长无中断cas9mRNA的过程包括以下步骤：1构建含VSW3RNA聚合酶特异性启动子的cas9质粒；2PCR法制备转录模板；3VSW3RNA聚合酶转录合成加帽cas9mRNA；4模板DNA消除和mRNA加尾；运用VSW3RNA聚合酶在低温下转录合成cas9mRNA不仅能够提高RNA产物的稳定性，更重要的是该酶转录合成cas9mRNA无中断RNA产物，提高了全长RNA的纯度，省掉分离除去中断RNA产物纯化步骤，减少纯化过程造成的损失，在保证RNA纯度的前提下提高cas9mRNA产量，是满足cas9mRNA大量合成需求，且能保证质量和降低生产成本的最佳选择。

主权项：1.低温VSW3RNA聚合酶体外转录合成全长无中断cas9mRNA的应用，其特征在于，所述VSW3RNA聚合酶体外转录合成全长无中断cas9mRNA的过程包括以下步骤：1构建含VSW3RNA聚合酶特异性启动子的cas9质粒；2PCR法制备转录模板；3在20℃条件下，VSW3RNA聚合酶转录合成加帽cas9mRNA；4模板DNA消除和mRNA加尾；其中，VSW3聚合酶的基因序列如序列表SEQIDNO.1所示，氨基酸序列如序列表SEQIDNO.2所示，所述VSW3RNA聚合酶特异性启动子的碱基序列如序列表SEQIDNO.3所示，所述转录模板的碱基序列如序列表SEQIDNO.4所示；以步骤1构建的cas9质粒为PCR模板，设计一对引物，扩增出包含完整VSW3RP启动子，cas9基因和SV40NLS碱基序列的转录模板DNA，所述引物如序列表SEQIDNO.5-6所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 武汉核圣生物技术有限公司 低温VSW3 RNA聚合酶体外转录合成全长无中断cas9 mRNA的应用

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