申请/专利权人：天津科技大学

申请日：2023-10-31

公开（公告）日：2024-03-05

公开（公告）号：CN117646076A

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/445

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.22#实质审查的生效;2024.03.05#公开

摘要：本发明公开了一种Argonaute介导的DNAzyme串联生物传感平台同时超灵敏双靶点检测耐药菌的方法及应用，称为STAND，利用所述方法，mecA和nuc基因的靶标被巧妙地转换为FAM和ROX荧光信号，能够同时在一个反应中检测nuc和mecA基因。检测限低至1CFUmL，动态范围为1至108CFUmL，该检测方法准确，检测范围较宽，方法简单快捷，易操作。

主权项：1.一种Argonaute介导的DNAzyme串联平台双靶点检测耐药菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1提取待检测菌的基因组；2选择耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA的基因组中特异性基因nuc和mecA序列设计用于MRSA检测的LAMP引物；3将混合的LAMP扩增体系放置于65℃孵育30min，得到LAMP扩增产物；4将羧化的磁珠和链霉亲和素混合，制备链霉亲和素包被磁珠；5将LAMP扩增产物加入PfAgo反应体系中，在95℃孵育15min，加入链霉亲和素包被磁珠孵育5min。反应结束后通过酶标仪进行荧光值测量，或者将反应管放置于3D检测装置中，获得检测结果；其中所述PfAgo反应体系为：2.4μMPfAgo，0.5μMnuc基因引导DNAs，0.5μMmecA基因引导DNAs，0.2μMnuc-Biotin-DNAzyme，0.2μMmecA-Biotin-DNAzyme，0.2μM荧光探针A，0.2μM荧光探针B以及反应缓冲液。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津科技大学 一种Argonaute介导的DNAzyme串联平台检测耐药菌的方法及应用

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