申请/专利权人：石河子大学;中山大学

申请日：2021-09-28

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN113881690B

主分类号：C12N15/40

分类号：C12N15/40;C12N15/70;C12N1/21;C07K1/22;C07K1/16;G01N33/68;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.12#授权;2022.07.19#实质审查的生效;2022.01.04#公开

摘要：本发明涉及一种含编码塔城蜱病毒2核蛋白基因的融合质粒、宿主菌及蛋白的制备方法和应用，属于病原检测试剂技术领域。本发明提供了密码子优化后的编码塔城蜱病毒2核蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。本发明所述融合质粒生产的塔城蜱病毒2核蛋白能在大肠杆菌中大量表达可溶性TcTV‑2‑NP，能与相应的抗体特异性的结合，用于NP抗体的检测时具有较高的敏感性和特异性，具有开发成为检测试剂盒的应用价值。

主权项：1.一种塔城蜱病毒2核蛋白制备方法，包括以下步骤：将宿主菌在液体培养基中培养，至OD600为0.4~0.6，加入IPTG诱导；诱导完成后，收集菌体，进行细胞裂解，离心取上清液；所述诱导的条件包括：IPTG终浓度设置为0.2mM，诱导温度为16℃，诱导时间为18h；将所述上清液进行镍柱纯化，得到粗蛋白；将所述粗蛋白进行凝胶过滤层析纯化，得到塔城蜱病毒2核蛋白；所述宿主菌为大肠杆菌BL21DE3；所述宿主菌含融合质粒；所述融合质粒的骨架载体为pET-21a；所述融合质粒含密码子优化后的编码塔城蜱病毒2核蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述镍柱纯化使用500mM的咪唑洗脱液进行洗脱。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 石河子大学;中山大学 一种含编码塔城蜱病毒2核蛋白基因的融合质粒、宿主菌及蛋白的制备方法和应用

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