申请/专利权人：北海开元生物科技有限公司

申请日：2021-12-10

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN114107414B

主分类号：C12P21/00

分类号：C12P21/00;C07K1/14;C07K1/30

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2022.03.18#实质审查的生效;2022.03.01#公开

摘要：本发明涉及发酵法制备苦瓜多肽的方法，可有效解决现有制备方法苦瓜多肽得率低，多肽分子量大，多肽不易舌下吸收，制备的多肽复溶率低的问题，方法是，苦瓜籽预处理，米曲霉菌种活化，米曲霉液体培养基扩培；将扩培的菌种接种到苦瓜籽预处理料中，进行发酵，发酵完成后将发酵料干燥，粉碎；采用乙醇溶液提取苦瓜籽多肽，离心收集过滤，蒸馏，获得苦瓜多肽水溶液，加水调整溶液体积，用氨水调pH，离心，取上清液；用酸调pH值，加入无水乙醇，进行沉淀，收集沉淀，烘干得苦瓜多肽。本发明制备方法科学合理，易操作，使用效果好，产品得率高，分子量易于舌下吸收，不使用有机溶剂丙酮，明显提升产品复溶率，即保证了产品质量，又提高了药用价值。

主权项：1.一种发酵法制备苦瓜多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：a）苦瓜籽预处理：将新鲜苦瓜籽料或浸泡后的干苦瓜籽料碾碎成大小为0.5-1.5mm的颗粒，使苦瓜籽的质量含水量为55-75%，进行米曲霉菌种活化和米曲霉液体培养基扩培；所述米曲霉（Aspergillusoryzae）为产纤维素酶和或脂肪酶和或蛋白酶的米曲霉菌株；所述的米曲霉菌种活化是，将米曲霉菌种接种于经过无菌验证的土豆培养基的试管斜面或平板中，土豆培养基是，马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15～20g，加蒸馏水1000mL制成，然后将接种后的斜面或平板在26～30℃下培养72h，得活化米曲霉菌种；所述的米曲霉液体培养基扩培，方法是，取500mL的锥形瓶，添加液体培养基200mL，每升液体培养基中含有苦瓜籽粉10-30g、蛋白胨50g、苦瓜籽油2-8mL、硝酸钠2g、磷酸氢二钾1g、氯化钠0.5g和硫酸亚铁0.01g，将液体培养基进行湿热灭菌，灭菌温度121℃，时间为15min；培养基温度降到23-27℃，移至超净工作台，接入活化米曲霉菌种，在26-30℃恒温摇床中培养，摇床振荡频率为200rmin，培养时间为36h，得扩培菌种；b）将扩培菌种接种到预处理的苦瓜籽料中，苦瓜籽料与扩培菌种的质量体积比为18-22︰1gmL，质量体积是指固体质量以g计，液体以mL计，进行发酵，温度28-32℃，湿度85-95%，发酵48-72h，发酵期间每8h翻拌一次，再将发酵料干燥，粉碎，得干燥的发酵苦瓜籽粉；c）乙醇溶液提取苦瓜籽多肽：发酵苦瓜籽粉加入质量浓度85%的乙醇浸没，22℃下浸泡提取30h，离心、过滤，滤液蒸馏回收乙醇，得固体物，固体物用水悬浮，用氨水调pH值至9.7，离心，得上清液；d）调pH值：上清液用1N的盐酸调pH值至3.5，加入等体积的无水乙醇，4℃下放置16小时，得沉淀，沉淀于44℃以下进行真空干燥，干燥后粉碎，过100目筛，即得苦瓜多肽，多肽分子量分布在5-6kDa。

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