申请/专利权人：青岛农业大学;山东天智绿业生物科技有限公司

申请日：2023-11-07

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN117210508B

主分类号：C12N15/90

分类号：C12N15/90;C12N15/31;C12P7/6432;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2023.12.29#实质审查的生效;2023.12.12#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种制备高产二十碳五烯酸裂殖壶菌的方法。包括以下步骤：将野生型裂殖壶菌菌株经过同源重组处理；将同源重组处理后的裂殖壶菌菌株进行筛选性平板培养基定向初筛，平板上能够生长出来形态大的菌落视为可能高产的菌株；将初筛的菌株进行指标测定，筛选后获得高产EPA菌株。本发明所述方法是增强裂殖壶菌中不饱和脂肪酸积累更加有效，而且该发明没有增加额外设备、操作简单、成本低、生产周期短，是有效提高EPA积累的有效实施策略。

主权项：1.一种制备高产二十碳五烯酸裂殖壶菌的方法，包括以下步骤：1）将野生型裂殖壶菌菌株经过同源重组处理；2）将同源重组处理后的裂殖壶菌菌株进行筛选性平板培养基定向初筛，平板上能够生长出来形态大的菌落视为可能高产的菌株；3）将初筛的菌株进行指标测定，筛选后获得高产EPA菌株，其特征在于：其中步骤1中所述的同源重组处理方法为利用同源重组的方法对裂殖壶菌Schizochytriumsp.ATCC20888中的seipin基因进行敲除，seipin基因序列如SEQIDNO.7所示，包括以下步骤：（1）以Schizochytriumsp.ATCC20888基因组DNA为模板，SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO5、SEQIDNO6所示的序列为引物，PCR扩增出seipin基因的上游SEIUP，所述上游SEIUP由SEQIDNO1SEQIDNO2所示的序列为引物PCR扩增所得，PCR扩增出seipin基因的下游SEIDOWN，所述下游SEIDOWN由SEQIDNO5SEQIDNO6所示的序列为引物，PCR扩增所得；（2）以ZEOCIN质粒为模板，SEQIDNO3、SEQIDNO4为引物，PCR扩增出BloR基因，所述BloR基因如SEQIDNO.10所示；（3）以上游SEIUP、下游SEIDOWN以及BloR基因为模板，SEQIDNO1SEQIDNO6为引物，PCR扩增三基因连接片段；（4）将步骤（3）所得的三基因连接片段用电转化的方法将其转入裂殖壶菌Schizochytriumsp.ATCC20888中，获得敲除后的裂殖壶菌基因工程菌株。

全文数据：

权利要求：

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