申请/专利权人：贵州民族大学

申请日：2024-01-24

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN117721156A

主分类号：C12N15/89

分类号：C12N15/89;C12N15/113;A01K67/033

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.05#实质审查的生效;2024.03.19#公开

摘要：本发明公开了一种分析SfNotch基因对白背飞虱发育影响的方法，具体包括下述步骤：1供试昆虫准备；2供试试剂准备；3总RNA提取与cDNA合成；4引物设计；5SfNotch的RNAi；6数据分析。该发明属于生物工程技术领域，具体提供了一种分析SfNotch基因对白背飞虱发育影响的方法，该方法以Notch信号通路受体为研究对象，研究其在白背飞虱翅发育中的功能，为进一步探究飞虱科昆虫翅的发育机制提供参考。

主权项：1.一种分析SfNotch基因对白背飞虱发育影响的方法，其特征在于，具体包括下述步骤：1供试昆虫准备白背飞虱，置于人工气候箱内，于16:8L:D，温度25±1℃，湿度75％±5的条件下，使用TN1水稻饲养繁殖多代，备用；2供试试剂准备HPTotalRANKit；HiFiScriptcDNA第一链合成试剂盒；EasyPureQuiControlGelExtractionKit；TaqPCRMix；E.coliDH5αCompetentCells；pMDTM18-TVectorCloningKit；TranscriptAidT7高产率转录试剂盒；GeneJETRNAPurificationKit；HiFiScriptcDNASynthesisKit；3总RNA提取与cDNA合成①将步骤1所准备的白背飞虱样品或组织参照HPTotalRAN试剂盒说明书提取总RNA；②使用1％琼脂糖凝胶电泳检测提取的总RNA质量，然后用NanoDrop2000分光光度计测定提取得到总RNA的浓度与纯度；③参照HiFiScriptcDNASynthesisKit说明书合成cDNA，合成后保存于-20℃冰箱；4引物设计基于白背飞虱转录组信息，从筛选到的Notch信号通路中选取Notch1基因GeneID：Scaffold-241.22，从美吉生物云系统中导出该基因的核苷酸序列，并在NCBI数据库中进行BLAST，比对验证序列的正确性以后，用PrimerPremier6.0软件从SfNotch基因的编码区分别设计RNAi和RT-qPCR引物，见下表，并进行合成； 5SfNotch的RNAi①选取白背飞虱3龄第1天若虫置于试管中，用CO2处理约90s使其暂时昏迷，将试虫置于带凹槽的3％琼脂糖凝胶板上；②使用IM-31微型注射器分别将SfNotch基因dsRNA注射到白背飞虱若虫体内，每头白背飞虱试虫注射约0.1μLdsRNA浓度为2000ngμL-8000ngμL，同时注射等体积的GFP基因dsRNA作为阴性对照；③每处理设置多个生物学重复，每个重复注射多头，注射完成后，将试虫放入装有新鲜TN1水稻苗的两通玻璃试管中，置于温度25±1℃、相对湿度70±5％、光周期16:8L:D的人工气候箱中饲养至羽化；④在注射标靶基因的dsRNA24h后，于各处理组随机挑取存活的虫体，液氮速冻处理，提取RNA，并反转录成cDNA，分别检测目的基因表达量变化情况；⑤羽化24h后，观察各处理组白背飞虱个体的翅伸展情况，吸取成虫，液氮速冻以后，使用NikonSMZ25体视显微镜进行拍照；6数据分析①所得数据均先用MicrosoftExcel整理后，再使用SPSS22.0软件进行统计分析；②RT-qPCR的相对表达量采用2-ΔΔCt法进行分析；③处理间的显著差异采用单因素方差分析ANOVA和Ducan法进行多重比较α＝0.05；④干扰效率检测结果采用独立样本T检验对其进行显著性分析。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 贵州民族大学 一种分析SfNotch基因对白背飞虱发育影响的方法

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