申请/专利权人：南昌大学

申请日：2023-11-18

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN117721189A

主分类号：C12Q1/686

分类号：C12Q1/686

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.05#实质审查的生效;2024.03.19#公开

摘要：本发明提供了一种巢式位点特异性单引物PCR方法及其应用。本发明提供的方法从每个遗传位点上鉴定出3个引物，引物A、B、C，首先，在60℃条件下引物A在基因组的特定位置合成ssDNA，随后的25℃，使得引物A有机会退火至刚刚合成的靶ssDNA上未知区域的某些位点，这样便成功实现了引物A的步移。随后的第二轮和第三轮PCR中，引物B和引物C完成相同的步移，此方法成功建立；而非目标产物在第二轮和第三轮反应过程中被抑制。本发明提供的方法能够通过一段已知序列即可探索其侧翼的未知序列，同时本发明能够应用于基因测序中缺口的填补。

主权项：1.一种巢式位点特异性单引物PCR方法，其特征在于，所述方法包括三轮巢式PCR反应，依次由一条巢式位点特异性单引物驱动，包括以下步骤：从已知基因组DNA序列上鉴定出3个嵌套式基因特异性引物，包括引物A、引物B、引物C；由所述引物A进行第一轮PCR反应，得到第一轮PCR产物；第一轮PCR反应结束后，由所述引物B进行第二轮PCR反应，得到第二轮PCR产物；所述第二轮反应结束后，由所述引物C进行第三轮PCR反应，所述第三轮反应结束后得到第三轮PCR产物；所述第二轮、第三轮PCR产物均为特异性产物。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南昌大学 一种巢式位点特异性单引物PCR方法及其应用

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