申请/专利权人：苏州先觉新材料科技有限公司

申请日：2023-08-07

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN116836266B

主分类号：C07K14/78

分类号：C07K14/78;C07K1/14;C07K1/34

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2023.10.24#实质审查的生效;2023.10.03#公开

摘要：本发明涉及一种胶原蛋白提取方法，公开了一种羊脊柱髓核胶原蛋白及其提取方法，提取方法包括以下步骤：先将切开的羊脊柱去除去除结缔组织和弹性纤维后提取髓核；然后用胰蛋白酶酶解，得到去细胞髓核；接着用核酸酶酶解，得到去核酸髓核；最后经酸酶结合法提取、离子平衡、透析得到羊脊柱髓核胶原蛋白。本发明同时利用胰蛋白酶和核酸酶对纤维环进行酶解，大大减少细胞碎片和核酸碎片对羊脊柱纤维环胶原蛋白提取效率的影响，有效解决了传统纤维环内胶原蛋白提取过程中杂质较多，胶原蛋白纯度和提取效率不足的问题。

主权项：1.一种羊脊柱髓核胶原蛋白提取方法，其特征在于其包括以下步骤：步骤S1、将切开的羊脊柱去除结缔组织和弹性纤维后提取髓核；步骤S2、将步骤S1中得到的髓核碎化后用胰蛋白酶酶解，得到去细胞髓核；步骤S3、将步骤S2中得到的去细胞髓核用核酸酶酶解，得到去核酸髓核；步骤S4、将步骤S3中得到的去核酸髓核清洗后经酸酶结合法提取得到髓核胶原蛋白上清液；步骤S5、对步骤S4中髓核胶原蛋白上清液调节pH平衡和离子平衡，得到髓核胶原蛋白溶液；步骤S6、对步骤S5得到的髓核胶原蛋白溶液进行透析；步骤S7、透析后经冷冻干燥得到羊脊柱髓核胶原蛋白；步骤S2具体包括以下步骤：步骤S21、将髓核剪成或切成小块；步骤S22、将小块的髓核浸泡于胰蛋白酶溶液中酶解，得到去细胞髓核，髓核与胰蛋白酶溶液的质量体积比为0.1g～2g:40～80mL，胰蛋白酶溶液浓度为0.1％～0.6％，浸泡时间为24～48h，浸泡温度为30℃～37℃，浸泡过程每4h更换一次胰蛋白酶溶液；步骤S3中具体为将去细胞髓核浸泡于核酸酶溶液中酶解，得到去核酸髓核，其中去细胞髓核与核酸酶溶液的质量体积比为0.5g～3g:50～200mL，核酸酶溶液浓度为3％～8％，浸泡时间为8～16h，浸泡温度为30℃～37℃；步骤S4中具体包括以下步骤：步骤S41、将去核酸髓核浸泡于清洗液中，得到去杂质髓核；其中清洗液包括磷酸盐缓冲液、聚乙二醇辛基苯基醚溶液或灭菌水；步骤S42、去杂质髓核经酸酶结合法提取，得到髓核胶原蛋白上清液，其中，酸酶结合法具体为将去杂质髓核加入酸溶液中，其中，酸酶结合法中所使用的酸溶液为浓度为0.3～0.8molL的乙酸或盐酸溶液，酸酶结合法所使用的酶为胃蛋白酶，胃蛋白酶用量与酶解的髓核质量之比为1～3：10～15，酸酶结合法提取温度为1～8℃，提取时间为24～48h；步骤S43、酸酶结合法提取完成后使用2000g～8000g超速离心，得到髓核胶原蛋白上清液。

全文数据：

权利要求：

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