申请/专利权人：苏州先觉新材料科技有限公司

申请日：2023-08-07

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN116836265B

主分类号：C07K14/78

分类号：C07K14/78;C07K1/14;C07K1/34;A61L27/24;A61L27/52

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2023.10.24#实质审查的生效;2023.10.03#公开

摘要：本发明涉及一种胶原蛋白，尤其涉及了一种胶原蛋白提取方法和应用，其提取方法包括步骤1将切开的羊脊柱去除上下背膜后提取纤维环；2将上述纤维环碎化后用胰蛋白酶酶解，得到去细胞纤维环；3将去细胞纤维环清洗后用核酸酶酶解，得到去核酸纤维环；4将去核酸纤维环清洗后经酸酶结合法提取、离子平衡、透析得到羊脊柱纤维环胶原蛋白。本发明能够大大减少细胞碎片和核酸碎片对胶原蛋白提取效率的影响，有效解决了传统纤维环内胶原蛋白提取过程中杂质较多，胶原蛋白纯度和提取效率不足的问题，也为羊脊柱提供了良好的生物资源再生方法。

主权项：1.一种羊脊柱纤维环胶原蛋白提取方法，其特征在于其包括以下步骤：步骤S1、将切开的羊脊柱剔除筋膜与脂肪组织，提取纤维环；步骤S2、将步骤S1中得到的纤维环碎化后用胰蛋白酶酶解，得到去细胞纤维环；步骤S3、将步骤S2中得到的去细胞纤维环清洗后用脱氧核糖内切酶核酸酶酶解，得到去核酸纤维环；步骤S4、将步骤S3中得到的去核酸纤维环清洗后经酸酶结合法提取得到纤维环胶原蛋白上清液；步骤S5、对步骤S4中的纤维环胶原蛋白上清液调节pH平衡和离子平衡，得到纤维环胶原蛋白溶液；步骤S6、对步骤S5中的纤维环胶原蛋白溶液进行透析；步骤S7、透析后经冻干干燥得到羊脊柱纤维环胶原蛋白；步骤S2具体包括以下步骤：步骤S21、将纤维环剪成或切成小块；步骤S22、将小块的纤维环浸泡于胰蛋白酶溶液中酶解，浸泡时间为24~48h，浸泡温度为30℃~37℃，得到去细胞纤维环；纤维环与胰蛋白酶溶液的质量体积比为0.1g~2g:40~80mL，胰蛋白酶溶液浓度为0.1%~0.6%；步骤S3具体为将去细胞纤维环浸泡于浓度为3%~8%的脱氧核糖内切酶核酸酶溶液中酶解，得到去核酸纤维环，其中纤维环与核酸酶溶液质量体积比为0.5g~3g:50~200mL，浸泡时间为8~16h，浸泡温度为30℃~37℃；步骤S4具体包括以下步骤：步骤S41、将去核酸纤维环浸泡于清洗液中24~48h，得到去杂质纤维环；其中清洗液包括磷酸盐缓冲液、聚乙二醇辛基苯基醚溶液或灭菌水；步骤S42、去杂质纤维环经酸酶结合法提取，得到纤维环胶原蛋白上清液，其中，酸酶结合法具体为将去杂质纤维环加入酸性溶液中，其中，酸酶结合法中所使用的酸性溶液为浓度为0.3~0.8molL的乙酸或盐酸溶液，酸酶结合法所使用的酶为胃蛋白酶，胃蛋白酶用量与酶解的纤维环质量之比为1~3：10~15，酸酶结合法提取温度为1~8℃，提取时间为24~48h；步骤S43、酸酶结合法提取完成后使用2000g~8000g超速离心，得到纤维环胶原蛋白上清液。

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权利要求：

百度查询： 苏州先觉新材料科技有限公司 一种羊脊柱纤维环胶原蛋白及其提取方法和应用

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