申请/专利权人：郑州轻工业大学

申请日：2021-10-19

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN113881790B

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;G01N33/53;G01N33/558;G01N33/58;C12R1/19;C12R1/42;C12R1/445;C12R1/385;C12R1/63;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2022.01.21#实质审查的生效;2022.01.04#公开

摘要：本发明公开了一种磁性Fe3O4@适配体的制备方法：制备Fe3O4粉末；将Fe3O4粉末用超纯水洗涤后重悬于超纯水中，加入适配体后于室温下震荡20‑30min，磁分离弃掉上清液，再用超纯水洗涤后重悬于超纯水中，即得。本发明还提供了利用Fe3O4@适配体与荧光试纸条联合在检测食源性致病菌方面的应用。本发明利用PCR扩增技术及荧光信号来提高检测食源性致病菌的灵敏度，具有检测灵敏度高，特异性强，检测时间短等优点，适用于食品样品中致病菌的检测。

主权项：1.一种磁性Fe3O4@适配体与荧光试纸条联合在检测食源性致病菌方面的应用，所述应用为非疾病诊断目的，其特征在于，包括如下步骤：a）根据食源性致病菌特异性基因片段设计一对上、下游引物，且上游引物5'端修饰生物素、下游引物5'端修饰荧光素；上游引物LM-hlyF序列为5'-GTAAGCGGAAAATCTGTCTC-3'，下游引物LM-hlyR序列为5'-ATTTCGTTACCTTCAGGATC-3'；b）将食源性致病菌样品与磁性Fe3O4@适配体置于37℃下反应20-40min，磁吸弃上清，PBS洗涤并重悬于PBS中，煮沸8-15min后冷却至室温，离心，取上清DNA并利用步骤a）中的引物进行PCR扩增，获得PCR产物；c）PCR产物滴加至荧光试纸条上，利用检测仪读取结果；步骤a）中，所述食源性致病菌为单核细胞增生李斯特菌；步骤b）中，所述磁性Fe3O4@适配体的制备方法包括如下步骤：1）在乙二醇中加入六水氯化铁、无水乙酸钠和EDTA-2Na并混匀，超声20-40min，转移至反应釜中180-220℃反应8-12h，冷却至室温，经洗涤、干燥，得到Fe3O4粉末；2）将Fe3O4粉末用超纯水洗涤后重悬于超纯水中，加入适配体后于室温下震荡20-30min，磁分离弃掉上清液，再用超纯水洗涤后重悬于超纯水中，即得；适配体序列为5'-TACTATCGCGGAGACAGCGCGGGAGGCACCGGGGA-3'；步骤c）所述荧光试纸条包括底板、以及依次粘接在底板上的样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，所述检测线上包被有抗生物素抗体，所述质控线上包被有抗荧光素抗体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 郑州轻工业大学 磁性四氧化三铁@适配体及其与荧光试纸条联合在检测食源性致病菌方面的应用

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