申请/专利权人：南京鼓楼医院

申请日：2022-01-07

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN114324126B

主分类号：G01N15/14

分类号：G01N15/14;C12N5/0781

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2022.04.29#实质审查的生效;2022.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种改变早期B细胞分化的方法。狼疮小鼠和患者的早期B细胞ProBB220+IgM‑CD43+c‑Kit+的比例和数量均显著降低，并且其中双阴性B细胞CD27‑IgD‑比例升高。本发明通过siRNA干扰狼疮小鼠造血干细胞HSC的Ptpn22的表达后，狼疮小鼠的HSC分化为ProB细胞的比例显著升高，且其中的双阴性B细胞比例降低。通过慢病毒介导的正常B6小鼠HSC过表达Ptpn22后，HSC分化为ProB细胞的比例显著降低，且其中的双阴性B细胞比例升高。本发明通过纠正狼疮早期B细胞分化的异常，可作为狼疮治疗的潜在技术。

主权项：1.一种改变ProB细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备正常B6或狼疮小鼠骨髓单细胞悬液；（2）将步骤（1）的骨髓单细胞悬液用Sca-1+磁珠分选试剂盒分选出HSC细胞；（3）将步骤（2）分选出的狼疮小鼠HSC细胞接种于96孔板，每孔添加200μl含细胞因子IL7、SCF、Flt3L的siRNA干扰专用培养基，加入Ptpn22siRNA试剂，放入培养箱，37℃培养3天；（4）将步骤（2）分选出的正常B6小鼠HSC细胞接种于96孔板，每孔添加200μl含细胞因子IL7、SCF、Flt3L的IMDM培养基，加入Ptpn22慢病毒，放入培养箱，37℃培养3天；（5）3天后收集步骤（3）和步骤（4）96孔板中细胞，分别用抗B220、IgM、CD43、c-kit、IgD、CD27流式抗体标记proB细胞和双阴性B细胞，用流式细胞仪检测proB细胞占总骨髓细胞的比例以及双阴性B细胞占proB细胞的比例；所述步骤（1）中狼疮小鼠包括雌性MRLlpr狼疮鼠、Pristane诱导狼疮鼠、R848诱导狼疮鼠和凋亡细胞诱导的狼疮鼠；所述步骤（3）和步骤（4）中细胞因子包含5~20ngmlIL7、10~40ngmlSCF、40~120ngmlFlt3L；所述步骤（5）中proB细胞流式抗体标记为B220+IgM-CD43+c-kit+；所述步骤（5）中双阴性B细胞流式抗体标记为CD27-IgD-。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京鼓楼医院 一种改变早期B细胞分化的方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD