申请/专利权人：西南大学

申请日：2022-03-04

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN114540420B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/12;C12N15/65;C12N15/113;A01K67/04

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2024.03.08#著录事项变更;2022.06.14#实质审查的生效;2022.05.27#公开

摘要：本发明提供一种通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法及其家蚕品种，其通过在家蚕PSG特异上调家蚕蜕皮激素应答因子，家蚕蜕皮激素应答因子包括BmEcRA、BmUSP、BmE74、BmHR4、BmHR3、BmFtz‑f1，使得家蚕PSG不同程度的退化，影响或阻止了丝素蛋白的合成，通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法获得的转基因家蚕具有只生产丝胶蛋白的特性，使其只能生产丝胶茧。该家蚕的蚕丝可作为一种良好的材料使用于医学、军工、光电等各个领域，具有重要的应用价值。

主权项：1.一种通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法，其特征在于，其通过在家蚕PSG特异上调家蚕蜕皮激素应答因子使得家蚕PSG不同程度的退化，影响或阻止了丝素蛋白的合成，家蚕蜕皮激素应答因子为下列应答因子之一：BmECRA、其基因序列为SEQIDNO.1，BmUSP、其基因序列为SEQIDNO.2，BmE74、其基因序列为SEQIDNO.3，BmHR4、其基因序列为SEQIDNO.4，BmHR3、其基因序列为SEQIDNO.5，BmFtz-f1、其基因序列为SEQIDNO.6，通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法获得的转基因家蚕具有只生产丝胶蛋白的特性，使其只能生产丝胶茧；所述通过特异上调家蚕蜕皮激素应答因子制备转基因丝胶茧的方法包括以下步骤：第一步、GAL4UAS表达载体构建；第二步、通过杂交获得PSG特异过表达的GAL4UAS转基因家蚕；第三步、对PSG特异过表达的GAL4UAS转基因家蚕的丝腺进行形态学的观察，并用相机拍摄照片留证和验证；第四步、对PSG特异过表达的GAL4UAS转基因家蚕的茧壳进行形态学的观察，并用相机拍摄照片留证和验证；第五步、对PSG特异过表达的GAL4UAS转基因家蚕的丝腺进行DNA提取，提取成功的DNA根据设计的引物进行PCR扩增，扩增结果进行核酸电泳；根据设计引物的大小与扩增出来的大小一致，说明转基因成功；其中，GAL4UAS表达载体构建包括构建了1种家蚕PSG特异GAL4表达载体，载体目的基因表达框包括:启动子为fibH、其基因序列为SEQIDNO.7；目的基因为编码GAL4蛋白结合结构域的基因序列GAL4BD、其基因序列为SEQIDNO.8；VP16为增强子、其基因序列为SEQIDNO.9；Ser1-polyA为终止信号、其基因序列为SEQIDNO.10；将目的表达框插入到piggyBac载体骨架上即pBac[3×P3-DsRed]；GAL4UAS表达载体构建包括分别构建了6种UAS表达载体：所述载体目的基因表达框包括：与GAL4蛋白结合的10×UAS序列、其基因序列为SEQIDNO.14；6种家蚕蜕皮激素应答因子中的任一种为目的基因，即BmEcRA、其基因序列为SEQIDNO.1，BmUSP、其基因序列为SEQIDNO.2，BmE74、其基因序列为SEQIDNO.3，BmHR4、其基因序列为SEQIDNO.4，BmHR3、其基因序列为SEQIDNO.5，或者BmFtz-f1、其基因序列为SEQIDNO.6；Ser1-polyA为终止信号；将目的表达框插入到piggyBac载体骨架上即pBac[3×P3-ECFP]。

全文数据：

权利要求：

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