申请/专利权人：重庆医科大学国际体外诊断研究院

申请日：2023-12-18

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117737202A

主分类号：C12Q1/6818

分类号：C12Q1/6818

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明涉及一种精准延迟药物释放的DNA计时器装置，包括基于封闭链Blocker和λ核酸外切酶λExo延迟的DNA链置换计时器装置和药物延迟释放装置。本发明通过调控Blocker和λExo的浓度实现对链置换反应的精准控制，从而进一步精确延迟药物ATP的释放。本发明的DNA计时器装置构建简单，由于λExo水解双链的方向性，使其具有非常低的泄露与对时间更精准的操控性。可用于简化临床药物治疗，减少给药次数，从而缩短患者康复时间，减少不必要的医疗费用，更利于复杂疾病尤其是慢性疾病的有效治愈。

主权项：1.一种精准延迟药物释放的DNA计时器装置，其特征在于包括如下步骤：1探针组装：DNA计时器装置的封闭链，模板探针，荧光探针，猝灭探针和触发链在1×λExo反应缓冲液67mMglycine-koh,2.5mMMgCl2,50μgmLBSA中95℃5min后，以每秒0.1℃的速率下降至4℃，并保持30min，放在4℃冰箱备用；2聚丙烯酰胺凝胶电泳流程：向体系中加入DNA延迟链置换各个组件和相应触发链，反应在PCR管中进行，孵育后将反应产物加入配置好的聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳；15mL12％聚丙烯酰胺凝胶的配制方法为：向管中加入ddH2O6mL，30％Acrylamide6mL，5×TBE3mL，TEMED10μL，10％AP110μL，37℃孵育；通过产物条带的变化分析链置换反应发生情况和酶对Blocker的消耗情况；3DNA适配体装载与释放ATP货物：ATP与DNA适配体链在1×λExo反应缓冲液中67mMglycine-koh,2.5mMMgCl2,50μgmLBSA用PCR管混合；ATP适配体在5′端和3′端分别用BHQ1和FAM标记，在37℃下与ATP孵育1h，确保适配体与ATP完全结合并猝灭荧光；适配体互补链相比于ATP更容易与适配体结合的序列，体系中存在一定浓度的适配体互补链后，互补链与适配体结合，从而释放出大量ATP；4PCR循环仪器实时荧光分析：加入不同Blocker浓度或不同λExo浓度来调控链置换反应或ATP延迟释放的时间，反应温度为37℃，反应时间为150-200分钟，反应体系为20μL，在PCR管中进行；延迟系统使用1×λExo缓冲液：67mMglycine-koh,2.5mMMgCl2,50μgmLBSA；在添加λExo和触发链后，立即用实时PCR循环仪器RotorGene，Qiagen在37℃下记录荧光，时间间隔为20s。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 重庆医科大学国际体外诊断研究院 一种精准延迟药物释放的DNA计时器装置

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