申请/专利权人：广东先康达生物科技有限公司

申请日：2024-02-20

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117736982A

主分类号：C12N5/0775

分类号：C12N5/0775;C12N5/077;A61K35/32;A61K35/28;A61P19/02;A61P29/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明公开了脂肪间充质干细胞复合制剂及其制备方法与应用;该复合试剂的制备包括步骤：脂肪组织碎片清洗后去污并离心去脂肪浮液；往离心管中加入脂肪组织消化酶再次离心后去上清，得细胞沉淀物；将细胞沉淀物转培养后得原代间充质该细胞；加入消化液消化细胞并将细胞液离心去上清，获传代后的干细胞沉淀物；传代后的干细胞沉淀物分成两等分别培养获得未成熟成软骨细胞溶液和脂肪间充质干细胞溶液；未成熟成软骨细胞溶液和脂肪间充质干细胞溶液分别离心去上清，得到脂肪间充质干细胞沉淀物和未成熟成软骨细胞沉淀物，再分别用激活血浆重悬后混合，得到脂肪间充质干细胞复合制剂能促进对损伤细胞和组织的修复。

主权项：1.一种脂肪间充质干细胞复合制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a、将获得的脂肪组织剪成碎片，并用生理盐水冲洗碎片，随后装入离心管中离心处理；离心停止后去除上层脂肪浮液；b、往离心管中加入脂肪组织消化酶进行消化处理，随后加入生理盐水，再次离心处理并去上清，获得细胞沉淀物；c、将细胞沉淀物转移至盛有脂肪间充质干细胞培养基的培养瓶中，进行细胞传代培养7~10天，获得原代脂肪间充质干细胞；d、往步骤c的培养瓶中加入胰蛋白酶-EDTA消化液，消化培养瓶壁上的所述原代脂肪间充质干细胞，得到细胞液；随后将细胞液转移至培养皿中并往培养皿中加入脂肪间充质干细胞培养基，随后转入离心管中离心去上清，获得传代后的干细胞沉淀物，备用；e、首先取步骤d中传代后的干细胞沉淀物一半的量用软骨细胞诱导分化培养基重悬，得到细胞悬液；随后将细胞悬液接种至培养瓶中并置于37℃、5%CO2、2~8%O2氛围的培养箱中静置培养6天，且在第3天换液一次；培养结束后去上清，获得未成熟成软骨细胞溶液；f、将步骤d中剩余传代后的干细胞沉淀物继续用脂肪间充质干细胞培养基传代培养6天，获得脂肪间充质干细胞溶液；g、分别收集步骤e中获得的未成熟成软骨细胞溶液和步骤f中获得的脂肪间充质干细胞溶液，并用生理盐水洗涤,随后分别离心去上清后得到脂肪间充质干细胞沉淀物和未成熟成软骨细胞沉淀物；h、将步骤g中的间充质干细胞沉淀物和未成熟成软骨细胞沉淀物分别用激活血浆重悬后混合，得到脂肪间充质干细胞复合制剂。

全文数据：

权利要求：

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