申请/专利权人：潍坊医学院

申请日：2023-11-02

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117737132A

主分类号：C12N15/866

分类号：C12N15/866;C12N15/67;C07K19/00

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.03.22#公开

摘要：本发明属于蛋白质工程和分子生物学技术领域，公开了一种类胶原序列增强重组受体蛋白在昆虫细胞中分泌的方法，合成经筛选优化的SCARA5类胶原结构域序列和目的蛋白表达基因，构建至昆虫细胞表达载体，获得重组载体：优化得到类胶原序列编码基因的核苷酸序列，通过PCR及测序确定载体构建正确；将载体转入DH10Bac大肠杆菌感受态细胞中，通过蓝白斑筛选获得重组成功的大肠杆菌，并提取其中的Bacmid；将Bacmid转染Sf9细胞，获取P3代的病毒以备蛋白表达；通过P3代病毒感染Hi5细胞，表达目的蛋白，纯化目的蛋白；监测得到的分泌蛋白的总量的增加效果。本发明增强分泌型受体蛋白的分泌表达量。

主权项：1.类胶原序列增强重组受体蛋白在昆虫细胞中分泌的方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，合成经筛选优化的SCARA5类胶原结构域序列和目的蛋白表达基因，构建至昆虫细胞表达载体，获得重组载体；第二步，将载体转入DH10Bac大肠杆菌感受态细胞中，通过蓝白斑筛选获得重组成功的大肠杆菌，并提取其中的Bacmid；第三步，将Bacmid转染Sf9细胞，包装杆状病毒，获取P3代的病毒以备蛋白表达；第四步，通过P3代病毒感染Hi5细胞，表达目的蛋白，通过亲和纯化凝胶色谱层析方式，纯化目的蛋白；第五步，监测得到的分泌蛋白的总量的增加效果。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 潍坊医学院 类胶原序列增强重组受体蛋白在昆虫细胞中分泌的方法

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